Bonjour à tous, en parlant des vecteurs intégratifs j'ai ceci dans mon cours mais je ne comprends pas..
"chez S.cerevisiae et d'autre levures, la recombinaison homologue est fréquent. Elle est encore plus favorisée si le vecteur est linéarisé par restriction au niveau de ce gène. "
est ce que ça parle à quelqu'un ?? merci
Bonsoir,
Pour faire de la recombinaison homologue, pour intégrer un transgène par exemple, il faut privilégier la linéarisation de ton plasmide portant un gène d'intérêt. Le plasmide étant d'une forme plutôt circulaire (ce n'est pas exactement vrai en réalité, mais c'est pour simplifier), en le traitant avec des enzymes de restriction adéquates, tu vas le le rendre linéaire. Ainsi l'intégration de ton transgène par RH se fera mieux.
La presence d'extrémités libres va induire la recombinaison qui chez cerevisiae est quasiment à 100% de la recombinaison homologue. Si tu linéarises ton plasmide dans un gènes alors c'est au niveau du site de linéarisation que l'intégration s'effectuera, ca te permet de l'intégrer précisément.
YOyo
Merci je comprends mieux. petite précision, quand on parle de recombinaison homologue on parle d'un éventuel crossing over après intégration du transgène ou simplement intégration du transgène ? merci d'avance
ça veut dire que si on ne le traite pas , il est complémentaire un peu partout sur le chromosome de S.cerevisiae ?Envoyé par Yoyo
