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Questions sur la PCR



  1. #1
    wolfgangouille

    Questions sur la PCR


    ------

    Bonjour à tous. Je suis en Terminale S et je posais une question sur la PCR.
    De quelle tailles sont les amorces? Leur taille doit être suffisante pour qu'il n'y ait pas d'ambiguité avec une autre partie de l'adn, non? merci

    -----

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  3. #2
    Jean-Luc P

    Re : Questions sur la PCR

    Tout dépend ce qu'on veut faire, mais en général pour avoir unicité de l'amplification on considère qu'il faut au moins 17 bases.
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

  4. #3
    Vinc

    Re : Questions sur la PCR

    Salut!
    Citation Envoyé par Jean-Luc P
    Tout dépend ce qu'on veut faire, mais en général pour avoir unicité de l'amplification on considère qu'il faut au moins 17 bases.
    Moui.....Ca dépend effectivement de beaucoup de choses... On peut avoir des primers plus courts mais c'est vrai qu'une vingtaine de pb reste une bonne base. Par contre on peut construire des amorçes nettement plus longues surtout lorsque l'on utilise la Recombinaison homologue pour faire de la mutagenèse dirigée...

    A+
    Vinc
    Primum non nocere.

  5. #4
    wolfgangouille

    Re : Questions sur la PCR

    Merci du renseignement. Sinon je me demandais comment ça se fait que le brin simple d'adn s'hybride avec l'amorce et non pas avec son brin complémentaire produit apres dénaturation. Je pense que c'est parce que l'amorce est bien plus petite et surtout en plus grande quantité mais ce n'est qu'une supposition. Sinon pourquoi l'extension des amorces ne se fait que d'un côté et pas de l'autre?
    Merci d'avance

  6. #5
    spillou

    Re : Questions sur la PCR

    Salut,

    la synthèse ne se produit que dans un sens et pas dans l'autre car l'ADN polymerase synthetise les pb dans le sens 5' - 3', et non l'inverse.

    Et oui, les deux primers sont en large excés.

    A+
    N'oubliez pas que ce n'est pas le temps qui passe, mais vous qui le traversez...

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Jean-Luc P

    Cool Re : Questions sur la PCR

    Citation Envoyé par wolfgangouille
    Merci du renseignement. Sinon je me demandais comment ça se fait que le brin simple d'adn s'hybride avec l'amorce et non pas avec son brin complémentaire produit apres dénaturation. Je pense que c'est parce que l'amorce est bien plus petite et surtout en plus grande quantité mais ce n'est qu'une supposition. Sinon pourquoi l'extension des amorces ne se fait que d'un côté et pas de l'autre?
    Merci d'avance
    C'est une question de probabilité, en moles les amorces sont largement majoritaires. Donc même si une partie de l'ADN se réhybride avec son brin complémentaire, la grande majorité s'hybridera avec l'amorce. La taille n'a pas vraiment à voir, ensuite c'est plus une question de Tm (température d'hybridation) : plus le le Tm de l'amorce est élevé, plus elle s'hybridera facilement lorsque la température du milieu réactionnel descend.

    Quand au sens d'amplification : c'est l'enzyme qui ne fonctionne que dans un sens 5'->3'
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

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  10. #7
    wolfgangouille

    Re : Questions sur la PCR

    Ah merci beaucoup pour ces éclairsissements !

  11. #8
    wolfgangouille

    Re : Questions sur la PCR

    Sinon quelqu'un a déjà utilisé un thermocycleur ou a déja réalisé une PCR? Juste par curiosité...
    Dernière modification par wolfgangouille ; 16/01/2006 à 15h23.

  12. #9
    Yoyo

    Re : Questions sur la PCR

    Salut

    Ben tout ceux qui ont fait de la PCR
    pourquoi cette question?

    Yoyo

  13. #10
    Jean-Luc P

    Cool Re : Questions sur la PCR

    Citation Envoyé par wolfgangouille
    Sinon quelqu'un a déjà utilisé un thermocycleur ou a déja réalisé une PCR? Juste par curiosité...

    Oui encore quatre aujourd'hui :-p
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

  14. #11
    wolfgangouille

    Re : Questions sur la PCR

    Salut Jean Luc tu fais quoi dans la vie? T'es dans le génie génétique?

  15. #12
    piwi

    Re : Questions sur la PCR

    En ce moment je n'utilise pas trop le thermocycler mais plutot le lightcycler

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  17. #13
    spillou

    Re : Questions sur la PCR

    Sur un lightcycler? ça doit être vraiment simpa de bosser la dessus...

    Et par simple curiosité, tu bosses ou sur strasbourg?

    A+

    Un strasbourgeois en exil
    N'oubliez pas que ce n'est pas le temps qui passe, mais vous qui le traversez...

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