Questions sur la PCR

[wolfgangouille]

Bonjour à tous. Je suis en Terminale S et je posais une question sur la PCR.
De quelle tailles sont les amorces? Leur taille doit être suffisante pour qu'il n'y ait pas d'ambiguité avec une autre partie de l'adn, non? merci
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[Jean-Luc P]

Tout dépend ce qu'on veut faire, mais en général pour avoir unicité de l'amplification on considère qu'il faut au moins 17 bases.

[Vinc]

Salut!

Tout dépend ce qu'on veut faire, mais en général pour avoir unicité de l'amplification on considère qu'il faut au moins 17 bases.

Moui.....Ca dépend effectivement de beaucoup de choses... On peut avoir des primers plus courts mais c'est vrai qu'une vingtaine de pb reste une bonne base. Par contre on peut construire des amorçes nettement plus longues surtout lorsque l'on utilise la Recombinaison homologue pour faire de la mutagenèse dirigée...

A+
Vinc

[wolfgangouille]

Merci du renseignement. Sinon je me demandais comment ça se fait que le brin simple d'adn s'hybride avec l'amorce et non pas avec son brin complémentaire produit apres dénaturation. Je pense que c'est parce que l'amorce est bien plus petite et surtout en plus grande quantité mais ce n'est qu'une supposition. Sinon pourquoi l'extension des amorces ne se fait que d'un côté et pas de l'autre?
Merci d'avance

[A voir en vidéo sur Futura]

[spillou]

Salut,

la synthèse ne se produit que dans un sens et pas dans l'autre car l'ADN polymerase synthetise les pb dans le sens 5' - 3', et non l'inverse.

Et oui, les deux primers sont en large excés.

A+

[Jean-Luc P]

Merci du renseignement. Sinon je me demandais comment ça se fait que le brin simple d'adn s'hybride avec l'amorce et non pas avec son brin complémentaire produit apres dénaturation. Je pense que c'est parce que l'amorce est bien plus petite et surtout en plus grande quantité mais ce n'est qu'une supposition. Sinon pourquoi l'extension des amorces ne se fait que d'un côté et pas de l'autre?
Merci d'avance

C'est une question de probabilité, en moles les amorces sont largement majoritaires. Donc même si une partie de l'ADN se réhybride avec son brin complémentaire, la grande majorité s'hybridera avec l'amorce. La taille n'a pas vraiment à voir, ensuite c'est plus une question de Tm (température d'hybridation) : plus le le Tm de l'amorce est élevé, plus elle s'hybridera facilement lorsque la température du milieu réactionnel descend.

Quand au sens d'amplification : c'est l'enzyme qui ne fonctionne que dans un sens 5'->3'

[wolfgangouille]

Ah merci beaucoup pour ces éclairsissements !

[wolfgangouille]

Sinon quelqu'un a déjà utilisé un thermocycleur ou a déja réalisé une PCR? Juste par curiosité...

[Yoyo]

Salut

Ben tout ceux qui ont fait de la PCR
pourquoi cette question?

Yoyo

[Jean-Luc P]

Sinon quelqu'un a déjà utilisé un thermocycleur ou a déja réalisé une PCR? Juste par curiosité...

Oui encore quatre aujourd'hui :-p

[wolfgangouille]

Salut Jean Luc tu fais quoi dans la vie? T'es dans le génie génétique?

[piwi]

En ce moment je n'utilise pas trop le thermocycler mais plutot le lightcycler

[spillou]

Sur un lightcycler? ça doit être vraiment simpa de bosser la dessus...

Et par simple curiosité, tu bosses ou sur strasbourg?

A+

Un strasbourgeois en exil