Bonjour à tous et à toutes,
Je me présente, je m'appelle Solène et je suis actuellement en master de biologie.
Je viens de découvrir ce forum qui m'a vraiment séduite.
J'essayerai de répondre à un maximum de questions dans la limite du possible.
Cependant, moi j'ai une petite question, savez-vous combien de temps une amorce s'hybride à un brin d'ADN ? (Ordre de grandeur, afin que je puisse la comparer au temps que met deux brins d'ADN à s'hybrider).
Je vous remercie d'avance.
Le temps d'hybridation est longueur-dépendant et température dépendant. Donc précise la taille de tes amorces ainsi que la température utilisée
Bonjour,
Une sonde de PCR fait généralement une vingtaine de paire de base. Et on laisse généralement s'hybrider pendant une trentaine de seconde.
Mais comme dis archaostol, le temps d'hybridation est température dépendant. Si tu as dénaturer un ADN double brin à 100°C (un peu près) et que tu le précipites d'un coups à 4°C, il va se réhybrider. Tellement vite qu'il va mal se réhybrider (mismatch, désapariement...). C'est pour cela que la température d'hybridation est généralement plus faible de 5-10°C de la température de fusion, nécessaire pour séparer les deux brins. Je rappelle également que la température de fusion est dépendante de la longueur de l'ADN, mais également de son pourcentage en GC (et d'autres paramètres plus complexes).
petites précisions : la température dépend de la longueur mais jusqu'a un certain point seulement. En PCRq, les temps d'hybridation sont généralement de quelques secondes (5-10 secondes) pour des 19-22mers.
Bonjour
La température lors de la phase d'hybridation est de 59°C et la longueur de l'ADN est d'une vingtaine de pb.
