Relations ligand-récepteur : binding (scintillation liquide)

[invite14ee2cc4]

Bonjour,
j'ai réalisé un TP de pharmacologie qui concernait l'étude des interactions ligand-récepteur. Pour cela, nous avons utilisé la méthode dite de déplacement. Elle consiste à observer le déplacement de la courbe de fixation d’un ligand connu et marqué, lorsque le ligand d’intérêt est ajouté, à différentes concentrations.

La fixation du ligand d’intérêt, ligand E, est étudiée pour six concentrations différentes : 1E-10, 1E-09, 1E-08, 1E-07, 1E-06 et 1E-05 M. Deux autres tubes à essais sont également préparés : l’un pour quantifier les liaisons totales (LT) et l’autre pour quantifier les liaisons non spécifiques (NS).

Voici les valeurs obtenues après scintillation liquide pour l'activité totale dans 50µL (AT) :



Ma première question est : comment déterminer la concentration en ligand fixe à partir de l'activité totale ?

Pour le moment, voici les calculs que j'ai réalisé : l'activité totale est de 111044 DPM dans 50µL soit 2.47E+17 Ci dans 50µL ou 4.94E+15 Ci/µL soit 8.82E+13 mmol/µL.

Est-ce correct ? Cette valeur me parait bien trop grande...

P.S : je suis passée des DPM aux Ci en multipliant les DPM par 2.22E12, et des Ci aux mmoles en divisant par RAS qui est de 56 Ci/mmol.

Cordialement,
Rose.
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[invite14ee2cc4]

Ensuite je dois tracer une courbe représentant la liaison spécifique du radioligand en fonction du log de la concentration en ligand compétiteur non marqué. Comment calcule t-on ces valeurs ?

[invite14ee2cc4]

Je sais que pour obtenir la liaison spécifique (LS) je dois soustraire à la valeur de la liaison totale (LT) la valeur de la liaison non spécifique (LNS) mais je ne possède qu'une seule valeur de LT et LNS alors comment puis-je tracer une courbe ?

[invite14ee2cc4]

La valeur que je calcule en faisant LS = LT - LNS est la valeur de LS lorsque [Ligand compétiteur] est nulle (LS de mon ligand radioactif (RX*) =100%).
Avec les données expérimentale cela me donne : LS = 1879,15 - 92,63 = 1786,52 DPM.

Si je prend la valeur obtenue après scintillation liquide pour [Ligand compétiteur]=1E-10, et qui est de 1636,93 DPM, alors 1879,15 - 1636,93 = 242.22 est la LT de RX* et donc 242,22 - 92,63 (LNS) = 149,59 est ma LS pour une concentration de 1E-10 en ligand compétiteur ?

Pour généraliser : LS = LT - liaison du ligand compétiteur - LNS (tout en DPM) ??

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite14ee2cc4]

Je viens de m'apercevoir d'une erreur : en réalité LS et toujours égale à LT - LNS, on ne connait pas la liaison en ligand compétiteur puisque celui-ci n'est pas marqué !

[invite14ee2cc4]

Voici les courbes que j'ai déjà put tracer :

Sans titre (1).png
Sans titre (4).png

La seconde est la linéarisation des données, une astuce pour trouver la valeur de l'IC50 : qu'en pensez-vous ?

[invite14ee2cc4]

Bonjour !

Pour le moment, voici les calculs que j'ai réalisé : l'activité totale est de 111044 DPM dans 50µL soit 2.47E+17 Ci dans 50µL ou 4.94E+15 Ci/µL soit 8.82E+13 mmol/µL.

Est-ce correct ? Cette valeur me parait bien trop grande...

P.S : je suis passée des DPM aux Ci en multipliant les DPM par 2.22E12, et des Ci aux mmoles en divisant par RAS qui est de 56 Ci/mmol.

Aucun avis là dessus ? J'en ai besoin pour passer à l'étape d'après qui est le calcul du KI !
Je vous informe que j'ai également trouvé un IC50 de 2.8145.E-08 mol/L. Qu'en pensez-vous ?



Rose.

[invite14ee2cc4]

Je me demande également quoi faire avec ma valeur de KI au final ? Que conclure ? Comment savoir si l'affinité de mon ligand inconnu est grande ou pas ?

[noir_ecaille]

Il faudrait qu'un pratiquant de la scintillation passe ^^;

Bonne rectification en #5.

Par contre, qu'est-ce que vous mesurez en mesure directe dans votre première courbe ? C'est peut-être parce que je ne connais pas la scintillation, avec les DPM et Ci, que j'ai du mal à interprêter ^^;