Dosage de sucres pas HPLC
Bonjour,
Voilà un extrait d'une publi que je doit etudier:
"Les polyols sont séparés par HPLC sur echangeur cationique avec des contre-ions Ca++ et Pb ++, et de l'eau distillée de 60 à 80 °C... (traduction personnel un peu aproximative j'imagine)
Je ne comprend pas comment on peu fixer des polyols, ici l'isomalt et le mannitol sur résine échangeuse de cation. Ces sucres peuvent ils être chargés positivement?
Merci pour vos réponses!
Bonjour Lesanto,
Le truc c'est que si la phase stationnaire est cationique, apparemment c'est le cas car les contre-ions sont des cations, c'est alors une colonne échangeuses d'anions, et non de cations, c'est logique.
Les cations de la phase mobile sont plutôt repoussés car ils ont la même charge que la phase stationnaire, ce n'est donc pas discriminatif pour ces ions là. Alors que pour des molécules anioniques, plus elles sont chargées, plus elles intéragissent avec la phase statio, elles sont donc plus ou moins retenues : c'est discriminatif.
Beaucoup de personnes se plantent sur la reconnaissance des colonnes échangeuses d'ions car il faut inverser.
Dans ce cas là, les fonctions alcools sont facilement déprotonées à pH basique et sont donc sous forme anionique, et donc séparable.
Des alcools sous forme cationique, c'est totalement impossible car l'alcool protoné est pas stable et il y a libération d'eau, c'est la déshydratation des sucres.
Heu, ne serait-ce pas le contraire? Les contres ions sont en général de charge opposée à celle de la phase stationnaire, puisqu'ils doivent saturer la phase mobile pour l'elution du produit, non?Envoyé par synchrotron
Voici l'extrait qui me pose problème en anglais:
Merci de ta réponse mais je ne comprend toujours pasThe polyols are separeted by HPLC on cation exchanger with Ca++ or Pb++ conter ion with high purity water at 60° to 80°
En fait c'est une phase statio négative, on y met des groupement positifs doublement chargés, ainsi ils gardent une charge libre positive. Du coup ça s'appelle plutôt une chromato ionique. Et justement, j'ai vu qu'elle était utilisée beaucoup pour séparer les oligosaccharides, car à pH basique, les polyols sont chargés négativement. On peut presque considérer que c'est une chromato échangeuse d'anions. La différence c'est que l'intéraction n'est pas directement avec la phase statio.
Le truc c'est que la ionique est plus résolutive que l'échangeuse et peut s'utiliser pour une gamme de pH large.C'est justement le but recherché ici puisqu'il faut que tu montes à un pH haut pour tes oligosacc.
De toute façon des fonctions alcools positives, c'est chimiquement impossible, et encore moins à la température où tu fais l'expérience.
En gros quand tu met des contre-ion, t'inverse ton type de chromato échangeuse, le problème, c'est que le nom donné est selon la polarité de la PS et non celui des véritables intéractions.
A+.
Merci beaucoup pour ta réponse qui me satisfait pleinement. Je n'avais pas encore étudié ce type d'interaction "indirect" mais je comprend le principe:
-La résine de charge négative est rendu positive par ajout de Ca 2+ et Pb 2+ dans le milieu.
-Les polyols chargés négativement à pH basique se fixent par l'intermédiaire des contres-ions.
-En ce qui concerne l'élution par contre, rien n'est précisé dans cette publi, mais j'imagine qu'elle peut se faire par un excés de Ca++ ou Pb ++?
Ou alors, comme c'est une intéraction ionique, il n'y a pas besoin d'excés de contres-ions, les solutés eluent progressivement selon le nombre de charge négative qu'ils contiennent?
Je pense que le dépôt de l'échantillon contenant les oligosaccharide se fait à pH basique pour que les polyols soient négatifs. Après, je suppose que l'élution peut se faire par un gradient de pH basique à pH acide, comme ça les fonctions alcools ont tendance à se reprotoner et à se libérer de leur intéraction avec les contre-ions progressivement. La vitesse de cette reprotonation dépend directement du pKa de la fonction alcool des oligosacc, qui varie entre eux, tu peux donc les séparer sur ce critère je pense.
Je pense que ça ne peut être qu'avec que le pH qu'on peut éluer car l'augmentation de la force ionique pourrait décrocher les contre-ions. Il vaut mieux faire ce type de manip quand t'as fini la séparation et que tu veux régénérer la colonne en éluant les contre-ions.
J'espère que mes hypothèses te conviennent.
A+.
