Bonjour,
Je réalise une qPCR Taqman qui est donc assez spécifique, je cible l'ADNr 16S. Depuis le début j'ai des signaux dans mes témoins négatifs, c'est aléatoire, c'est à dire que j'en ai soit pour le NTC, soit pour le témoin d'extraction, soit les deux et en plus un duplicat sur deux donc rien à voir avec un problème de puits. Comme ça fait deux mois, j'ai déjà eu le temps de changer de lot de mix, d'eau pour l'extraction (qui n'est pas la même que l'eau pour la pcr), d'aliquot de sonde, rien y fait. Je réalise le mix sous une hotte PCR.
Je voudrais déjà tester mes produits pour voir d'où ça vient, je voulais faire un test avec la sonde seule d'une part, les amorces seules d'autre part et même l'eau sans rien d'autre dans le puits si jamais c'est un problème de capteur (je m'imagine tout) mais là je ne sais pas si c'est possible de faire ça. Quel conseil avez vous à me donner pour trouver la cause ? Ce qui me fait perdre la tête c'est que si c'est vraiment une contamination c'est forcement ma bactérie qui est dedans vu que c'est du taqman...
Merci d'avance pour votre aide.
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