Extraction protéique/ARN du foie (souris) avec Omni bead Ruptor
Bonjour,
Je suis assistante ingénieur en Biologie. Nous avons reçu un nouveau Homogéneiseur à billes bead ruptor 12 avec lequel nous voulons réaliser des extractions ARN et proteique sur le foie sauf que nous avons aucune idée du programme et la vitesse qu'il faut utiliser (en gros le protocole de la machine). J'ai essayé de rechercher sur research gate ou pubmed mais les données sont limitées. Si quelqu'un en a déjà fait pourrait il m’aiguiller ?
D'avance merci
Je ne connais pas ce matériel, mais il ressemble à tous les autres homogénéiseurs à billes.
Le foie est un tissu très facile à broyer. Si vous mettez a mi-vitesse (ca a l'air d'etre 4 m/s) pendant 15 secondes, vous devriez avoir tout broyé et ne plus retrouver de morceaux dans les tubes. Le problème pourrait être l'échauffement, à vérifier. Vous pouvez aussi faire plus fort et sur des cycles plus courts, quitte à mettre dans la glace et a recommencer (par exemple 8m/s pendant 10 secondes)
Arpès, ça dépend aussi du volume de tampon, de la taille/matiere/quantité de billes....
La vie trouve toujours un chemin
Re : Extraction protéique/ARN du foie (souris) avec Omni bead Ruptor
Merci pour votre réponse
Alors on mettrait une pièce de 50 mg de foie dans un tube 2ml avec un tampon qiazol (700 ul). Les infos que j'ai trouvé hier c'est qu'il faudrait utiliser 4 à 5 billes en ceramique de 2mm. Pour le programme j'ai vu deux cycles de 45 sec à 5m/s pour le rat sur une etude comparative de plusieurs broyeur mais les organes étaient du rat. Reste à savoir si c'est pareil pour la souris ...
l'échauffement c'est à dire ?
Bonne journée à vous
2 cycles de 45sec a 5m/s ca va marcher. Mais c'est probablement déja beaucoup
Pour l'échauffement, je veux dire que le frottement des billes et du tube échauffe l'échantillon. C'est pour ca qu'il faut minimiser le temps de broyage pour ne pas chauffer inutilement.
Essayez deja moins longtemps, et regardez ce que ça donne. Si vous ne voyez plus de morceaux, inutile de continuer !
Pour les billes 2mm ca parait pas mal ! POur le foie, on peut aussi broyer a la bille en acier de 4-6mm, ou avec des céramiques plus petites (1.4, et même 0.6-0.8)
Et rat-souris c'est pareil !
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