Bonjour à tous,
je suis face à un exercice de dosage de substrat et d'enzyme cependant je galère sur une question qui me demande d'affirmer ou d'infirmer que dans le mélange réactionnel est en excès d'enzyme et de son substrat.
Comment je peux déterminer sa ?
merci
Je débute, soyez indulgent
si vous mettiez l'énoncé ?
Normalement, on est en excès d'enzyme ou de substrat quand, si on en rajoute encore, on ne modifie pas Vi
La vie trouve toujours un chemin
Voici l’énoncé :
la question est de savoir si à la 3 ème ligne l'enzyme (SO) et son substrat sont en excès dans le mélange. J'ai beaucoup cherché sur internet ect mais sans avoir trouvé
a partir de ce que je vois on ne peut pas savoir
il manque des données
c'est quoi la suite ?
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la suite c'est des questions mais rien qui peut nous donner d'indice
si c'est un exercice d'enzymo il ya bien des données à un moment... parce que la on ne peut pas avancer
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C'est un exercice isolé, j'ai une correction non officiel qui dit que " La sarcosine n’est pas apportée dans le mélange réactionnel mais est issue de la réaction catalysée par la SO. En revanche la SO doit être en excès. "
la Sarcosine est issus de la réaction catalysée par la CA non ? regardez le schéma et je comprends pas aussi leur raisonnement
Oui, la sarcosine provient de la réaction 2.
Le but du dosage est de déterminer la concentration de créatinine, pour cela il faut transformer TOUTE la créatinine en "colorant"
il faut donc que toutes les réactions soient totales et donc les enzymes en quantité suffisante. Par contre, à part expérimentalement on ne peut pas le deviner !
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d'accord, donc il faut absolument dans toutes les réaction d'enzymo ou l'on veut déterminer une concentration de quelque chose, il faut que les enzymes soient en excès pour que les réactions soient totales ? si Oui qu'en est il pour les substrat ? ils doivent etre limitant du coup ?
pour connaitre une concentration de substrat en quantifiant un produit, il faut que la réaction soit totale oui
Par contre, le substrat, sa concentration est inconnue puisque c'est ce que l'on cherche. Il faut cependant que sa concentration soit suffisante pour qu'on puisse détecter le produit, mais pas saturante car dans certaines conditions un excès de substrat inhibe la réaction.
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J'ai tout compris MERCI !!
J'ai une seconde question : pourquoi l'item "la diminution d'absorbance à 560 nm est proportionnelle en [Créat]"
le corrigé non officiel dit que c'est le mot diminution qui gene et qu'il faut le remplacer par l'augmentation MAIS selon moi la relation de l'absorbance selon beer lambert que ca soit une augmentation ou une diminution d'absorbance, cette dernière sera toujours proportionnelle à une concentration non ? Pourquoi ici le mot diminution gènerai surtout qu'on voit les case se dénoircir petit à petit
Si on mesure l'apparition d'un produit, l'absorbance augmente.
Si on mesure la disparition d'un substrat, elle diminue. Dans les deux cas elle est proportionnelle à la variation de concentration en effet.
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du coup ici avec l'espèce d'échelle de teinte des cases qui est au départ super foncé pour la créat et hyper claire pour le composé finale, on a une diminution d'absorbance non ? par ce que a part comme ca je ne voit pas comment on peut dire que le patient est atteint ou non
non, ici la couleur des cases c'est juste pour faire joli
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de toute facon il nous a pas posé la question de si le patient est atteint ou non mais avec ca on peut pas le savoir ducoup ? parce que ce prof ne laisse aucun mot au hasard dans les énnoncé et la phrase en dessous de tableau me met le doute. Pourquoi nous avoir dit que le composé produit absorbe à 560 ?
finalement cet item "la diminution d'absorbance à 560 nm est proportionnelle en [Créat]" est vrai ? donc pas faux comme le corrigé non officiel suggère ?
non c'est faux. Le colorant est le produit de la réaction, donc l'absorbance augmente. La différence d'absorbance avant et après la réaction est proportionnelle a [créat]
Sans avoir la valeur, on ne peut rien dire sur le patient
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a mais OK ! en gros si à la fin on aurait obtenu comme produit un des substrat de la réaction genre de la créat ou de la Sarcosine on aurait eu une diminution d'absorbance ?
soit c'est un produit, soit c'est un substrat. pas les deux
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je me suis mal exprimé, si par exemple on aurait obtenu comme substrat à la fin de la créat, il y aurait eu une diminution d'absorbance ? si jamais je me trompe ici donnez moi un exemple
non, on n'obtient pas un substrat, mais un produit.
Si la réaction avait lieu dans l'autre sens, c'est à dire que l'enzyme avait consommé le colorant qui absorbe, pour produire de la créat, on aurait observé une diminution de l'absorbance
un exemple simple avec une enzyme qui va dans les deux sens, la lactate deshydrogénase LDH
Le NADH absorbe à 340 mais pas le NAD+
lactate + NADH <--> pyruvate + NAD+
Si on met en présence de la LDH du lactate et du NADH, elle produit du pyruvate et du NAD+, et l'absorbance diminue
Si on met en présence de la LDH du pyruvate et du NAD+, elle produit du lactate et du NADH et l'absorbance augmente.
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a ok donc il faut que l'enzyme va dans les deux sens.
==> Dans mon exo ici elles vont toutes dans un seul sens vu la direction des flèche donc on mesure l'apparition d'un produit donc on aura l'augmentation de l'absorbance.
==> si jamais on doit partir du colorant qui est le produit, que les flèche vont dans l'autre sens et qu'on nous demande de mesurer l'absorbance de la créat, on aurait obtenue une diminution d'absorbance.
ais je bien synthétisé ?
non. si c'est l'absorbance de la créatinine que l'on mesurait, elle augmenterait si on en produisait.
Mais justement, on fait ce dosage indirect car on ne peut pas mesurer l'absorbance de la créatinine.
si les enzymes allaient dans l'autre sens, on mesurait une diminution de l'absorbance due a la consommation du colorant
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en fait, vu que dans la réaction 1 on en a produit, on peut que avoir une augmentation de l'absorbance. Si jamais on n'en avait pas produit, comment on peut savoir que l'absorbance à augmenté ?
je ne comprends pas la question
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Finalement non je viens de comprendre. Merci beaucoup pour votre aide
