Digestion par une enzyme de restriction

[lucie1318]

Bonjour

J’ai un exercice pour un TP mais je n’arrive pas démarrer les calculs

On veut faire une digestion par EcorI avec 10ug de l’ADN dans un volume final de 50 ul.
On sait que EcorI a une concentration de 50 u/ul dans 50% de glycérol.
Le tampon dans lequel fonctionne l’enzyme a une concentration mère de 10X

Donner les différentes étapes du protocole en sachant que la concentration en glycérol ne dépasse pas 50% et un excès de 10 fois en unité d’enzyme est recommandé par rapport à la quantité d’ADN en ug.


Voilà ce que j’ai déjà fait :
volume d'ADN pour en avoir 10ug : c=m/V donc v= 10/0.2 = 50 uL

Donc il faut calculer la quantité d'enzyme pour digérer 10 ug et le
Volume

Mais je ne sais pas comment calculer la concentration en glycérol et combien il faut diluer pour atteindre les 50%

Ça représenterait un certain volume donc après on déduit le volume de tampon concentré pour avoir une concentration finale de 10X.

Merci
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[Flyingbike]

ok pour les 50µL

Vous avez 10µg d'ADN on vous dit qu'il faut 10 fois plus d'unités d'enzyme donc 100

Quel volume cela fait ?

Par contre je ne comprends pas cette histoire de glycérol. L'enzyme sera très diluée et on ne prend habituellement pas en compte la concentration restante de glycérol. Vous êtes sure de l'énoncé ?