problème d'extraction d'ADN
J'ai réalisé l'extraction d'un ADN végétal, j'ai eu problème lors de la dérnière étape qui consiste à dissoudre le culot dans l'eau, en fait j'arrive pas à dissoudre le culot
J'ai déposé le culot dans un bain marie à 37°C espérant que le culot se dissout mais en vain.
l'étape précedente était d'éliminer l'éthanol et laisser sécher le culot pendant une nuit à T° ambiante, est ce que le laisser sécher une nuit pose ce problème?
Merci bien de m'aider à résoudre mon problème.
Bonjour,
Une nuit c'est peut-être un peu trop, le but est d'évaporer complétement l'éthanol mais pas de sécher l'ADN jusqu'à la moelleLe mieux étant de réussir à enlever le maximum d'éthanol à la pipette sans embarquer le culot avec, et d'avoir un temps de séchage plus court. 1h max si l'étape précédente est bien faite.
Et tant que vous recommencez, utilisez du TE pour re-suspendre la méduse d'ADN, l'eau n'est pas un très bon tampon de conservation pour l'ADN et le pH légèrement alcalin du Tris-EDTA va aider à la dissoudre l'ADN.
J'espère que ça marchera
Bonne soirée
Liniark
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Vous pouvez également chauffer un peu plus fort jusqu’à 95 par exemple.
La vie trouve toujours un chemin
Merci beaucoup pour votre réponse, j'ai diminué le temps de séchage et ça marchait apparemment
Bonjour,
ça ne va pas dénaturer l'ADN une aussi haute température?
Hé non, c'est l'avantage de l'ADN, contrairement aux protéines, la renaturation est possible. Tant que le retour aux conditions initiales ne se fait pas de manière trop brutale, les brins se réapparient parfaitement. Et ça nous arrange bien... Sinon on ne pourrait même pas faire une simple PCR
Liniark
ah d'accord, merci bien
