Question général sur la HPLC

[invite5bdbfef0]

Bonjour à tous,
Après un petit tp d'observation de l'utilisation de la HPLC je dois rendre un petit rapport général. Seulement après mes recherches je suis plutôt perplexe et je finis par m'embrouiller.

Le TP repose sur l'extraction de la vanilline dans le sucre vanillé.

Pour ça mon prof a dit que la colonne était polaire et on a utilisé comme éluant acétonitrile + eau ... Hors après recherche je doute que la colonne est polaire puisque notre éluant l'est aussi...

Ensuite il demande l'importance du choix de la longueur d'onde...
Après recherche j'ai trouvé qu'il faut choisir une longueur à laquelle tous les composé sont bien visible et distingue
Par contre là ma question est un peu absurde car par exemple si j'ai un composé à 230nm et une autre à 280nm pourquoi on choisit une longueur d'onde de 230nm alors que la plus grande est 280 ?

Enfin ma dernière question à laquelle je n'ai pas vraiment trouvé de réponse : Quel type de colonne et gamme de longueur d'onde on aurait utiliser pour les sucres ?
Pourtant j'ai cherché mais je n'ai trouvé que des référence commercial et les quelques truc qui semblait tenir la route correspondait en fait à la chroma ionique.

Ca serait sympa si j'ai une réponse assez rapide car je dois boucler ce rapport de tp pour demain
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[HarleyApril]

1) colonne polaire ou apolaire
tu as peut-être mal entendu, à l'oreille la différence polaire apolaire est petite
pour peu qu'il y ait du bruit à ce moment là ...
Vu que la vaniline est apolaire, les interactions seront meilleures avec une colonne apolaire type C18

2) 230/280
ah, m'enfin, ils ont pas le max à la même longueur d'onde
bon, mais s'ils absorbent encore correctement quelquepart, c'est suffisant
autrement dit, si ton composé qui a un max à 280 absorbe correctement à 230, tu peux tout à fait utiliser 230 puisque tu verras les deux composés à cette longueur d'onde
jette un oeil aux spectres UV (sans doute disponibles sur
http://www.aist.go.jp/RIODB/SDBS/cgi-bin/cre_index.cgi )
et vois si ça colle

pour les sucres, regarde le spectre UV du glucose sur le site susnommé
bien évidemment, il faudra une colonne polaire dans ce cas, puisque c'est plein de groupements polaires partout

bonne rédaction