On veut séparer 2 polypeptides A (pHi 6.2) et B (pHi 7.8) dans un mélange par chromatographie sur DEAE-cellulose"
5g de résine sèche sont placés dans une colonnequi est ensuite lavée à l'aide d'une solution de NaOhH 1M. Après ce traitement, la colonne est rincée à l'eau distillée jusqu'a neutralité. On fait ensuite passer une solution de NaCl 2M en excès. L'éluat correspondant à cette deuxième opérationest recueilli et dosé par 11.5 mL de solution de HCl 1.04M.
On travaille initialement à pH 9.8. 1mL du mélange est déposé en haut de la colonne puis le mélange est élué avec un tampon de pH de plus en plus faible. L'absorbance des différentes fractions collectées est mesurée à 280nm. A et B ont le même coefficient molaire d'absorption à 280nm.
Les résultats sont obtenus dans le tableau:
Fraction 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Volume (mL) 1,5 1,5 1,5 1,5 1,4 1,3 1,2 1,2 1,2 1,2
Abs (280nm) 0 0,01 0,29 0,2 0,05 0 0,05 0,1 0,05 0
1) La résine DEAE-cellulose est-elle un échangeur d'anions ou de cation? Expliquez votre démarche
2)Déterminer la capacité de rétention de la résine en mmol d'ions par g de résine sèche
3)Faire le diagramme d'élution et déterminer le volume d'élution de A et de B?
4)Calculer le % de peptides récupérés
C'est un sujet que j'ai a traiter et je le trouve particulièrement ardu... Pourriez vous m'aider pour les questions 2 et 4. En effet, la DEAE est échangeur d'anion et j'ai reussi la 3. Merci d'avance!!
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