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Chromatographie ionique (pb ardue)



  1. #1
    pierrotdu56

    Chromatographie ionique (pb ardue)

    On veut séparer 2 polypeptides A (pHi 6.2) et B (pHi 7.8) dans un mélange par chromatographie sur DEAE-cellulose"
    5g de résine sèche sont placés dans une colonnequi est ensuite lavée à l'aide d'une solution de NaOhH 1M. Après ce traitement, la colonne est rincée à l'eau distillée jusqu'a neutralité. On fait ensuite passer une solution de NaCl 2M en excès. L'éluat correspondant à cette deuxième opérationest recueilli et dosé par 11.5 mL de solution de HCl 1.04M.

    On travaille initialement à pH 9.8. 1mL du mélange est déposé en haut de la colonne puis le mélange est élué avec un tampon de pH de plus en plus faible. L'absorbance des différentes fractions collectées est mesurée à 280nm. A et B ont le même coefficient molaire d'absorption à 280nm.
    Les résultats sont obtenus dans le tableau:

    Fraction 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
    Volume (mL) 1,5 1,5 1,5 1,5 1,4 1,3 1,2 1,2 1,2 1,2
    Abs (280nm) 0 0,01 0,29 0,2 0,05 0 0,05 0,1 0,05 0

    1) La résine DEAE-cellulose est-elle un échangeur d'anions ou de cation? Expliquez votre démarche

    2)Déterminer la capacité de rétention de la résine en mmol d'ions par g de résine sèche

    3)Faire le diagramme d'élution et déterminer le volume d'élution de A et de B?

    4)Calculer le % de peptides récupérés

    C'est un sujet que j'ai a traiter et je le trouve particulièrement ardu... Pourriez vous m'aider pour les questions 2 et 4. En effet, la DEAE est échangeur d'anion et j'ai reussi la 3. Merci d'avance!!

    -----


  2. #2
    samamsam

    Re : Chromatographie ionique (pb ardue)

    euh je pense que tu n'es pas obligé d'inonder le forum avec plusieurs fois ton message !!
    tu recevra une réponse de ceux qui peuvent te renseigner mais faut être patient !

  3. #3
    tail

    Re : Chromatographie ionique (pb ardue)

    Bonsoir

    2
    La resine a retenu les ions correspondant à 11.5*1.04/1000 eq qui sont contenu dans 5g
    4
    A priori les deux produits sont élués (100% de récupération)
    on supposera que c’est le % relatif qui est cherché
    Ils ont le même coef de réponse donc le rapport de concentration est le rapport des DO
    Il faudra prendre en compte le volume de chaque collecte , sa DO ainsi que l’ensemble des collectes de chaque composé

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