Regénération HPLC
Bonjour,
J'ai un HPLC dans mon laboratoire. Je veux faire la regénération de la colonne sur mon HPLC
Y a t'il une méthode USP ou une méthode que je pourrais avoir à quelque part?
J'en demande beaucoup et j'apprécie l'aide et votre expérience
Juste un lien me conviendrait énormément
Merci beaucoup
Alain
Bonsoir
Quelle est la nature de la colonne, avec quel éluant a t'elle été utilisée et éventuellement quel type d'échantillon a été injecté?
solvant c'est du méthanol et de l'eau
C'est pour déterminer la concentration de la caféine
Merci de prendre ton temps pour répondre
Si tu a une procédure j'en serai heureux
Alain
bonjour
à priori la colonne doit être une phase apolaire C8 ou C18, utilise tu un tampon?
Quelle est la forme des pics ou le probleme observé.
Car il y a plusieurs possibilités:
frittés partielement colmaté --> augmentation de pression
changer le fritté, c'est uine operation délicate sur une colonne analytique mais faisable. On peut envisager l'utilisation de prècolonne.
trou en tête de colonne due à un tassement de la phase:--> pics deformés.
en laboratoire de controle jeter la colonne; mais il est possible de repacker la colonne ou de colmater le trou si l'on a de la phase et les adaptateurs.
fixation de composés non élués dans les conditions de travail sur la phase.
- d'abord laver la colonne à l'eau pour enlever toute trace de sel (phosphate en particulier).
Si cela n'a pas été fait faire passer 100 de methanol ou d'acetonitrile pendant 10 minute et retester la colonne cela peut suffire.
-en utilisant des solvant miscibles entre eux on peut passer des solvant de moins en moins polaires puis faire la manipulation dans l'autre sens
exemple en gradient ou par palier si l'on n'a que de l'isocratique
eau 100%-----------methanol (ou acetonitrile) 100% ----- tetrahydrofuranne 100%------(exeptionnellement chloroforme 100%) --------tetrahydrofuranne 100%--methanol (ou acetonitrile) 100% -------methanol (ou acetonitrile) 100%-----eau
(en général cela suffit il nous est arrivé avec un produit particulier d'aller jusqu'à l'heptane mais il fallait apres retour à l'eau passer une solution tres diluée d'acide acetique pour que la colonne retrouve ses caracteristiques.)
Utiliser un debit de l'ordre de 0.5 ml/min ou même moins car il y a de fortes variations de viscosité du solvant et donc de pression en tête de colonne
Il est possible de faire un gradient eau THF il sont miscible et de ne pas passer par le mèthanol cela depand des milieu que l'on a utilisés.
(cas particuliers
Il nous est arrivé avec des composés azotés qui se fixaient sur la colonne d'injecter de temps en temps (5 à 6 heures) une solution de chlorhydrate de pyridine concentrée (colonne sous éluant) qui les desorbaient et de pouvoir ainsi continer les analyses)
fixation d'ions metalliques sur la phase.
lavage avec une solution d'acide acetique dilué (1 ml/litre) ou même acide sulfirique 0.1N dilué 10 à 100 fois.
Il pourrait être interressant de consulter
pratical HPLC method development
Lloyd RSnyder
Wiley interscience
page 63 à 83
pour la deformation des pics
bonjour
je viens de trouver un lien qui pourrait être utile
http://www.mac-mod.com/cc/cc-7-1.html
et plus general
http://www.mac-mod.com/cc/cc-toc.html
Re : Regénération HPLC
merci énormément,
Autre chose. Existe t'il une procédure USP ou ACS pour la regénération de la colonne?
Moi en tant que compagnie dois je utiliser une méthode USP ( car je vends du USP) ou je peuxx utiliser ton lien?
Merci encore
Alain
Bonjour
A ma connaissance il n'y a pas de methode pharmacopée.
Tu dois faire une procedure decrivant le protocole que tu as choisi et apres un test permettant de verifier que ta colonne est conforme (temps de retention, caracteristique des pics).
Si un simple passage à 100 % de methanol suffit, tu le decrit dans le mode operatoire de la methode en fin de manipulation.
Re : Regénération HPLC
Merci beaucoup pour l'information
Alain
