Chromatographie d'échange d'ions

[invite39dcadc1]

Bonjour,
Voilà je me retrouve avec une question dont je sais pas la réponse....

Les acides aminés obtenus par l'hydrolyse acide totale d'un peptide sont séparés par chromatograpie d'échange d'ions. Quel support chromatographique allez vous utiliser:diéthyl amino ethyl (qui est un échangeur d'anions) ou carboxy methyl (échangeur de cations)? Comment allez-vous séparer les différents acides aminés du peptide? Justifiez en sachant que les acides aminés sont: Gly (R:-H), Ala (R:-CH3) et Phe (R:- CH2-C6H5)

S'il y avait des acides aminés qui ont des groupements ionisables dans leur R, ça serait beaucoup plus facilement.Mais, comme ça, tous les acides aminés auront presque la même charge dans différent tampons, et donc on pourrait pas les séparer un par un.Comment on va faire alors?
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[invite04c1908f]

Trouve le pHi puis compare le au pH de ta solution:
-si pH>pHi -> globalement chargé -
-si ph<pHi -> globalement chargé +
-si pH=pHi -> neutre

et de là tu vois si tu vois utilisé du DEAE ou du CM...

mais je suis pas trop sure d'avoir compris ton pb!

[invite39dcadc1]

Mon problème est que le pHi de tous ces acides aminés sont très proches:

Gly=5.95
Ala=6
Phe=5.5

Même si rajoute des tampons avec n'importe quels pH, ils auront tous la même charge et seront tous élués en même temps...

Alors comment je peux faire pour les éluer un par un par une chromatographie d'échange d'ions ?

[Zellus]

Salut,

Pour la colonne utilisée (DEAE ou CM), ça dépend juste du pH de ton tampon de départ. Après tu peux éluer tes peptides avec un gradient de pH.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite39dcadc1]

Justement, aucun pH n'est indiqué (c'est à moi de choisir le pH de la solution en fonction du support choisi).
Si je décide d'utilitser le CM, dont le pKa est environ 2, elle est donc échangeur de cations.
Si je fait passer une solution à ce pH, mes acides aminés seront tous chargés positivement, parce que le pH de la solution< du pHi de tous les 3 AA ( Gly, Ala, Phe).
Si je fait avec le DEAE, tous mes AA seront chargés negativement et ils seront tous retenus sur la colonne ,parce que les pHi de mes AA sont très proches. Je ne peux pas trouver une solution correspondante qui me peremttera de les éluer 1 par 1????

[HarleyApril]

bonjour
tu les fixes tous, puis les élue un par un en utilisant un gradiant de pH (cf la réponse plus haut)
cordialement