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Chromatographie: comment faire une bonne colonne ?



  1. #1
    DarkSasuke

    Chromatographie: comment faire une bonne colonne ?


    ------

    Salut tout le monde,

    J'ai un gros problème. J'aimerais savoir comment préparer une colonne correctement:

    1) Coton + tige en verre au dessus
    2) Ajout de 2 cm de sable selon le diamètre de la colonne
    3) Ajout d'éluant - Tassage
    4) Dissoudre de la silice dans de l'éluant
    5) Ajouter doucement le gel de silice pour avoir 15-16 cm
    6) Tasser - Laisser 2-3 cm d'éluant
    7) Ajouter de 1 cm de sable
    8) Tassage
    9) Ajout du produit à séparer préalablement dissous dans un minimum d'éluant. Ca doit aller sur le sable.
    10) On élue

    Est-ce que ça vous parait bon ou je fais quelque chose de mal qui expliquerait pourquoi mes chromato marchent jamais ?

    Merci d'avance pour votre aide

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    Fajan

    Re : Chromatographie: comment faire une bonne colonne ?

    Peut etre parceque tu choisis le mauvais système de solvant pour éluer ton composé?

    Dans JOC il y a un article sur comment faire une chromato flash (si ca t'intéresse je le retrouverai)

    Il y en avait un autre dans tetrahedron letters ou tetrahedron qui te fournissait un fichier excel pour que tu choisisses ton éluant en fonction des Rf de ta ccm.

  4. #3
    Biotage

    Re : Chromatographie: comment faire une bonne colonne ?

    Bonjour,

    Pourquoi ne pas utiliser une colonne pré-packé ?

    Cordialement,
    KG

  5. #4
    Miky_Mike

    Re : Chromatographie: comment faire une bonne colonne ?

    Citation Envoyé par Biotage Voir le message
    Bonjour,

    Pourquoi ne pas utiliser une colonne pré-packé ?

    Cordialement,
    KG
    On voit ceux qui bossent en industrie lol

    Il y a deux méthodes principales pour préparer les colonnes : par voie sèche et humide. Celle que tu décris DarkSasuke est la méthode par voie humide, que je trouve pas mal. Perso je préfère les préparer par voie sèche, mais ça c'est au goût de chacun. Par contre moi je dépose le produit directement sur le gel de silice. En général on ne pense pas à tasser le sable au dessus de la silice, du coup quand tu déposes ton prod dessus, desfois ca migre un peu de travers...

    Après, bien préparer les colonnes ne permet pas toujours de bien séparer tes différents produits. C'est surtout sur ton éluant (ou ton gradient d'éluent) qu'il faut jouer. Personnelement, pour un produit à isoler, je fais déjà une (des) CCM afin que le produit que je veux séparer migre à environ un tiers de la plaque. Lorsque j'ai trouvé l'éluant qui remplit cette condition, j'utilise le même pour la colonne.

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    laza

    Re : Chromatographie: comment faire une bonne colonne ?

    Citation Envoyé par Fajan Voir le message
    Peut etre parceque tu choisis le mauvais système de solvant pour éluer ton composé?

    Dans JOC il y a un article sur comment faire une chromato flash (si ca t'intéresse je le retrouverai)

    Il y en avait un autre dans tetrahedron letters ou tetrahedron qui te fournissait un fichier excel pour que tu choisisses ton éluant en fonction des Rf de ta ccm.
    est ce que vous pouvez donner précision sur cette publication?

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