Gros probleme hplc

[invite8b6cf929]

Bonjour,

J'ai un gros problème au niveau de mon HPLC.

Est-ce qu'une phase mobile 90% méthanol et 10% d'un mélange (136ml d'acide acétique et 850ml d'H2O) peut dégrader ma colonne qui est une C18?

Car j'ai effectuer plusieurs analyse de mon produit avec une phase mobile de 100% méthanol et j'avais des beau pics. Maintenant, je n'ai plus que des tous petit pics et très laid. Cela peut-il être du à l'utilisation de la phase mobile avec de l'acide acétique? Aurait-elle dégrader ma colonne?

Que dois-je faire pour en être sur?

Merci pour vos réponses
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[invitea69ab818]

Premièrement je ne comprends pas pourquoi tu as changé de phase mobile qui avait l'air de bien marcher?
Ensuite les colonnes C18 sont utilisées en phase inverse pour des solutés plutôt apolaires. Les phases C18 sont des phases très difficile à dégrader mais on y arrive par plusieurs moyens: utilisation de phase mobile apolaire, pH de phase mobile supérieur à 7 ou inférieur à 2 (notamment avec des acides forts HCl, HNO3, ...). Quand tu utilises de l'eau acidifiée en général c'est tamponnée. Si tu as des pics tout petit c'est peut-être que lac oncentration de ton espèce est ridicule par rapport à celle utilisée pour tes essais. Si tes pics sont dissimétrique c'est que tu n'utilises pas la bonne phase mobile.

Tu peux aussi essayer de nettoyer ta colonne pour ça Vraian m'avait conseillé de retourner la colonne utiliser une phase mobile acétonitrile-eau acidifié 50/50 à un débitmax de 0;2ml/min. Faire plusieur "injections" de méthanol et laissait tourner toute une nuit. Tu peux aussi t'amuser à démonter ta colonne l'ouvrir et regarder si la phase stationnaire est toujours à l'interieur mais si tu la réutilises après tes temps de rétention risquent d'être modifiés.

Tout ça est très général avec plus de détailspeut-être que j'arriverais à mieux t'aider, en tout cas j'essayerai.

[invitef5d8180a]

bonjour,
si tu fais un gradient et que tu n'es pas tamponé, l'augmentation de la concentration en acide acétique risque de te donner des pics dégueulasses en fonction de ce que tu analyses.
Pour confirmer que tu n'as pas ruiné ta colonne, tu devrais revenir à ton précédent système d'élution et voir si tu retrouves tes "beaux pics". Si c'est le cas, c'est juste que ton nouveau système est hyper foireux.

[sfnsfn2]

Bonjour, Que dois-je faire pour en être sur?

la concentration et la quantité injectée est elle la même ?.................. le nombre de pics dans les deux injections est il le même ? possible de dégradation des composés ..................... l'absorption de tes composés dans les deux phases mobiles est il similaire ? peut etre qu'ils n'absorbe pas bien dans cette phase ( spectre d'absorption) donc changement sur la détection................. la solubilité ...................... les pics sont petits mais larges..................... une fuite .................. colonne dégradée: si vous utilisez un PDA , vous pouvez vérifier le spectre des composés s'ils sont les mêmes, la pression, la reproductibilité .................

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitedc9edb21]

J'effectue une série d'analyse sur Hplc Hitachi lacrom. quand je lance la serie d'analyse l'analyse s’arrête après quelques injections, d'abord ça s'est arrêté à la 20 é injection, puis à la 7è , puis à la 4è injection chaque fois avec arrêt de la pompe. Autre détails pour la 1è et la toute dernière fois pour relancer l'analyse il y a un message d'erreur de prise en charge du détecteur (DAD) Que faire ?

[invitef5d8180a]

Bonjour et bienvenue sur le forum,
1) la politesse est de mise, un bonjour et un merci sont toujours fortement appréciés.
2) Lire la charte avant de poster! (Nouvelle discussion dans un nouveau topic, surtout quand cela n'a rien à voir)

En ce qui concerne ton problème, n'avez vous pas de contact pour le SAV?

[invitedc9edb21]

Merci pour les remarques. Au fait c'est quoi le SAV ?

[invitedc9edb21]

Merci pour les remarques. Au fait c'est quoi le SAV ?

[invitef5d8180a]

le service après vente.
Le vendeurs d'HPLC connaissent les problèmes récurrents des machines qu'ils vendent. Si les tiens est fréquent sur ce type d'HPLC, ils devraient pouvoir te renseigner assez rapidement.

[invitedc9edb21]

Merci pour le conseil