Chromatographie par echange d'ion

[invitee7d63440]

Bonjour a tous

en fait dans mon cours est ecrit la phrase suivante " le PH et la concentration saline de ma solution tampon dans laquelle la protiene est dissoute sont choisie de sorte que la proteine desirée soit fortement liée à l'echangeur d'ion "

alors je me demande comment je peux choisir les valeurs de PH et la concentration saline au laboratoire ???!!!
En ce qui concerne le PH , tout ce que je sais c'est qu'il faut eviter d'etre au pI de la proteine pour que cette derniere ait une charge et donc peut agir avec l'echangeur ( enfin , il faut voir si c'est juste ou pas ! )
et je ne comprends pas ce que la concentration saline peut modifier dans la réaction entre ma protéine désiré et l’échangeur d'ions....est ce qu'on augmentant la concentration saline a la fin de l'elution , je pousse la protiene encore lié au echangeur à se dissocier de ce dernier, vu que les ions du sel vont entrer en competition avec ma proteine ??? ou c'est vraiment pas ca

bon , vous voyez que c'est trop flou dans ma tete tout ça et j'espere que vous allez m'aider et MERCI
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[invitef5d8180a]

bonjour,
ta première assertion est vraie. pour interagir avec l'échangeur il faut être chargé.
dans une chromato ionique au cours de l'analyse on fait généralement un gradient de salinité. quand la salinité augmente (à pH toujours constant : utilisation d'un tampon) tu décroches de plus en plus tes protéines ou acides nucléiques, tes solutés en somme.
C'est comme la phase inverse où tu baisses la polarité de l'éluant au cours du run. ici, il n'est pas question de polarité mais salinité et il faut l'augmenter au cours du run. Donc ta deuxième assertion est vraie aussi.

[invitee7d63440]

Merci bcp pour la reponse

et j'ai encore une question ! le PH on le choisir selon quel critere ?? est ce que c'est juste pour apparaître une charge sur mon échangeur?? par exemple si j'ai un échangeur CH2-COOH qui a un pKa = 4.6, je dois choisir un pH supérieur a 4.6 pour faire apparaître la charge négatif sur mon échangeur.....est ce que c'est juste ça ??

et si c'est vrai comment vais je choisir le pH pour rendre chargée une résine qui porte plutôt un NA a la place d'un proton.... ( pour moi le PKa est une question de protonné et deprotonné )....enfin j'espere que j'ai pas dit de betise ( la chimie est du chinois pour moi )

[invitef5d8180a]

Pour choisir ton pH, il te faut faire de la bibliographie en fonction de ton composé. Si qqu'un l'a déjà décrit, c'est pas la peine de s'embêter.
sinon, pH aux alentour de 7 c'est bien si tu as pKa = 4.6. Il te faut faire un tampon.
Pour ce qui est de la phase stationnaire, il t'en faut une cationique. Ce sera certainement des amines quaternaires à la surface donc pas besoin de te soucier du pH pour ça. Il faut juste que tu te mettes dans la gamme d'usage de la colonne qui est préconisée par le fabricant (sinon tu risque de la dégrader ou de perdre en résolution).

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitee7d63440]

Oki merci bcp pour les reponses ! donc c'est le fabriquant qui me donne le pH que je dois utiliser et tout