Chromatographie: CCM 1 seule tache

[invite9ce3c7db]

Bonjour à tous,

J'ai beau faire le tour sur le forum, je n'ai pas trouvé de réponse à ma question. Dans l'étude du potentiel thérapeutique d'une plante j'ai du effectué une chromatographie sur couche mince, j'ai utilisé des extraits méthanolique et hexanique de ma plante. J'ai tout d'abord essayé avec des solvants purs: hexane, ensuite méthanol, ce qui n'a rien donné. 'ai ensuite utilisé un système Acétate d'éthyle - Hexane 5:5, 6:4 et ensuite 8:2, j'ai obtenu une seule tache pour les différentes proportions et uniquement avec l'extrait hexanique... mon superviseur m'a alors dit que je n'avais qu'un seul produit et que donc je n'avais pas à faire la chromato sur colonne....

Je dois expliquer le contexte, je suis partie à l'étranger pour réaliser cette recherche pour mon mémoire (le sujet m'a été donné) et les superviseurs m'ont déjà fait part de protocole totalement faux pour d'autre manipulation, et le technicien de labo chimie n'a jamais réalisé de chromatographie (comme moi, formation plus biologique) et le conditions point de vue matériel et solvants très limitées!

J'ai donc un doute, aurais-je du faire des essais avec d'autre système de solvant? Peut être que plusieurs taches aurait pu être observées... C'est pour avoir une bonne conclusion critique pour mon travail

Si quelqu'un veut bien m'éclairer, ça serait bien sympa!

Merci
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[moco]

Si on n'obtient qu'une seule tache lors d'une chromato couche mince, et de plus en changeant les proportions des constituants, c'est qu'il n'y a qu'un soluté. Ou alors que les éventuels autres constituants sont en concentrations extrêmement faibles.

[invite9ce3c7db]

Mais pour bien comprendre, une seule tache justifie que la chromatographie sur colonne n'a pas lieu d'être? la tache ne correspondant qu'à un seul soluté... ils n'est pas possible que 2 soluté sensiblement identiques forme cette tache, et que la chromato sur colonne puisse les séparer (Non la chromato n'est pas du tout mon domaine ^^')
Et si j'avais utilisé d'autre solvants, autre que l'hexane et l'acétate d'éthyle, j'aurai toujours obtenu une seule tache, alors?

Merci en tout cas pour avoir répondu si vite!

[CN_is_Chuck_Norris]

bonjour,
oui, tu peux avoir des co-migration et ne pas voir d'autres composés (bien que le fait d'avoir utilisé différents système d'élution amoindri cette possibilité).
de plus, comment révèles-tu ta CCM? UV, pulvérisation acide sulfurique, iode, vaniline, acide phosphomolybdique, permanganate, ninhydrine...??
le problème avec la CCM, c'est qu'on ne voit pas toujours tout d'un coup. il faut souvent utiliser une panoplie de révélateurs. Enfin, si tu veux confirmer la pureté de ton produit, fais un autre type d'analyse (RMN, LC-MS, GC-FID)

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9ce3c7db]

Bonjour CN_is_Chuck_Norris,

Merci pour votre réponse! J'ai utilisé une lampe UV pour observer la tache.

J'y vois un peu plus clair maintenant, je mentionnerai dans mes recommandations, comme vous me l'avez expliquez qu'une confirmation de la pureté comme étape supplémentaire aurait été bonne à envisager, ceci dit cela ne remet pas en question la suite de mon travail.

Encore merci à vous CN_is_Chuck_Norris et Moco!

[shaddock91]

Bonjour. Si la tache unique en CCM n'est pas en Rf 0 (point de départ de l'élution) ou en Rf 1 (front de solvant) cela va bien dans le sens d'un composé pur. Il est intéressant de faire une CCM de la solution très diluée, on augmente ainsi le ratio silice/produit et on obtient une meilleure résolution.

[invite9ce3c7db]

Bonjour à tous,

J'aurai encore besoin d'une petite confirmation, sur une de mes plaques où je n'obtiens qu'une tache on voit encore les 2 spots orangé sur la ligne de départ, cela veut il dire que la séparation ne s'est pas complétement réalisée ou c'est normal?

Merci

[RuBisCO]

Bonjour,
Ce phénomène arrive parfois quand le produit à nettement plus d'affinité pour la phase stationnaire que pour la phase mobile, donc dans un sens, la séparation ne s'est pas bien réalisée (et cela veut dire que la chromatographie sur colonne ne sera pas possible, ce composé restera piégé dans la colonne et ne sortira pas).
Je peux te donner une méthode d'optimisation de solvant de CCM : lien vers le site scienceamusante.net.

[invite9ce3c7db]

Merci RuBisCO

Cela veut dire que d'autre test avec des solvants différents auraient pu démontrer plusieurs taches et non une seule? Mon système de solvant n'a pu donc démontrer un seul produit sur plusieurs?

Si c'est cela, le composé restera piége dans la colonne uniquement si j'utilise le même système de solvant qui ne m'a démontré qu'une seule tache, et donc si il existe un sytème de solvant qui fait migrer ma tache restée sur la ligne de départ, je pourrai alors tester la chromato sur colonne??

[RuBisCO]

Exactement. Un solvant qui marche sur couche mince marchera sur colonne (à condition d'utiliser la même phase fixe, sinon on peut avoir des surprises )

[invite9ce3c7db]

Merci beaucoup !!

[shaddock91]

Concernant la transposition CCM ----> colonne on a même intérêt à utiliser un solvant un peu moins polaire pour la colonne. Ceci est dû au rapport produit/silice qui est beaucoup plus faible lors du passage à la colonne.