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Chromatographie sur couche mince CCM



  1. #1
    Mawooo

    Chromatographie sur couche mince CCM


    ------

    Bonjour je me demandais si vous saviez comment je pourrais améliorer la séparation d'acides aminés qui ont un Rf rapproché avec la technique de la chromatographie sur couche mince
    merci bye

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    shaddock91

    Re : Chromatographie sur couche mince CCM

    Bonjour. Le mieux serait d'utiliser des plaques de CCM (silice phase inverse C18) avec un éluant classique utilisé en HPLC.

    Sinon, si tu utilises des plaques de silice en phase normale, il existe un excellent éluant (un mélange de BuOH, AcOBu, AcOH, H2O) qui donne un pouvoir de résolution élevé (je ne me souviens plus des proportions hélas). Le seul problème est le temps d'élution...

  4. #3
    Mawooo

    Re : Chromatographie sur couche mince CCM

    Voila le solvant utilisé etait constitué de n-butanol, acide acétique et de leau 80:20:20 a un ph 2.8. je ne sais aps exactement quelle plaque j'ai utilisé malheureusement c'était une plaque de gel de silice. Est-ce que le temps de migration peut jouer beaucoup et le temps de chauffage après pour le séchage. Nous avons mis 3uL de solution dacide aminé est-ce assez.... bcp de question comme vous pouvez remarquer
    merci encore

  5. #4
    shaddock91

    Re : Chromatographie sur couche mince CCM

    Je pense que l'éluant utilisé est correct pour une plaque de silice phase normale. En ce qui concerne le temps d'élution, il est recommandé d'arrêter l'élution à quelques mm du haut de la plaque afin de lire les composés ayant un Rf de 1 (front de solvant). Si on "oublie la plaque", la résolution peut se trouver dégradée, la surface des taches va augmenter et leur contour va devenir flou.
    En ce qui concerne la concentration des dépôts, 3 uL ne veut pas dire grand chose, cela dépend de la concentration initiale de la solution.
    Astuce: après avoir effectué les dépôts sur la plaque, il est préférable de sécher (température modérée, sèche cheveux) afin de ne pas perturber la composition de l'éluant au début de la migration.
    Quand au temps pour le séchage après élution, il n'a pas grande importance, il est préférable de ne pas chauffer >100°C pour éviter la dégradation des aminoacides, ce qui pourrait empêcher la révélation à la ninhydrine par exemple.

  6. A voir en vidéo sur Futura

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