Déterminer la concentration d'une solution de prot. avec la méthode de Bradford

[invite13e4bad5]

Bonsoir, j'ai eu un TP dont le but était de calculer la concentration d'une solution de BSA inconnue. Mon problème ne concerne pas les méthodes de calcul ect mais le résultat. La protéine de [C] inconnue était présente dans deux tubes à essai : l'un contenait 50µl de BSA inconnue et 50µ d'eau. L'autre : 100µl de BSA inconnue. Leur absorbance respective (trouvé expérimentalement) : 0.889 et 1.170 et leur masse respective (trouvée graphiquement) : 23µg et 57.3µg. Le problème est qu'en calculant leur concentration je ne trouve pas la même chose (bon c'est normal puisqu'il y des erreurs de mesures) mais la j'ai quand même 11.3µg/µl d'écart entre les deux ce qui me semble beaucoup. D'où ma question : pensez-vous que l'erreur est trop grande? Faut-il faire la moyenne de ces concentrations pour se fixer un juste milieu?
Merci d'avance et bonne soirée.
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[invite13e4bad5]

J'ai également oublié un autre point. On demande pourquoi mettre de l'eau dans la cuve de référence et non le tube 1 directement? Pour ce dosage nous avons utilisé le liquide de bradford alors coloré (les différents tubes réagissent différemment à ce liquide : on peut observer des couleurs étalonnées). Selon moi, il faut réaliser l'autozéro : l'eau présente une absorbance extrêmement faible car elle est incolore elle est donc utilisée comme référence pour les mesures. Le tube 1 présente une certaine coloration (gris vert qui) qui devient bleue au fil des autres tubes >> ne peut pas être une référence.
J'avoue qu'il me manque quelques points de compréhension sur le sujet (PS : les cuves étaient placées les unes derrière les autres avec la référence en première = spectrophotométrie monofaisceau?).
Merci d'avance et bonne soirée =).