Examen Chromato Master 2

[pharma76]

Bonjour à tous et à toutes !

J’ai un examen de Master 2 dans quelques jours et il y a quelques points de chromatographie qui me posent problème.

Nous avons les annales de 2010 à 2014, j’ai refais tous les exercices..exceptées quelques questions.

1) Nous analysons des alcaloides (Quinine/Quinidine). J’ai pu déterminer qu’on utilise une chromatographie de phase inverse car la colonne est une C18 et la phase mobile est un mélange d’Acétonitrile et Tampon Phosphate pH 2.5

Si j’ai bien compris, le tampon P est utilisé pour maintenir le pH durant l’analyse et ne pas modifier l’état d’ionisation des alcaloides ?

Quelles précautions particulières doit on prendre en compte en ce qui concerne l’analyse de ces composés par CLHP ?

Quels sont à votre avis les paramètres physicochimiques des molécules qui régissent principalement leur rétention ? (Cette question revient tout le temps!! Comment savoir quels paramètres structuraux régissent la rétention?)

2) Dans un autre exercice on doit séparer des composés apolaires, aflatoxines.

On utilise 3 colonnes différentes : C18 ( 5µm , 150mm*4.6mm) ; C18 (3µm , 150mm*4.6mm) ; C18 ( 2.7*µm ; 100mm*4.6mm).

Sur quelles paramètres de la séparation ou de performance ces différences peuvent jouer ?

3) Dernière question: On fait une électrophorèse capillaire. On utilise un tampon constitué de 20mM borate, 30mM SDS à pH8.5 contenant 7% v/v ACN. On utilise une tension de 20kV.

Commentez et justifiez la composition du tampon (Nature, pH, additif) ??


Merci d’avance pour votre aide, ce sont des questions qui reviennent toujours et sur lesquelles je ne suis pas très à l’aise.
-----

[sfnsfn2]

Quelles précautions particulières doit on prendre en compte en ce qui concerne l’analyse de ces composés par CLHP ?

les alcaloides sont es bases organiques et les colonnes chromatographiques sont à base de la silice. lorsqu'on fait un greffage il reste des silanols libres qui ont un caractère acide et on sait que l'acide réagit avec la base ce qui donne une trainée du pic ou une grande rétention du pic (possibilité que le composé ne sort pas de la colonne)
pour éviter ce problème, il faut toujours utiliser une colonne end capped

Quels sont à votre avis les paramètres physicochimiques des molécules qui régissent principalement leur rétention ? (Cette question revient tout le temps!! Comment savoir quels paramètres structuraux régissent la rétention?)

la rétention est due à l'interaction entre le soluté-phase stationnaire et la solubilité dans la phase mobbile.
la phase stationnaire;
Chaque constituant adopte une vitesse de migration qui lui est propre en fonction de sa
solubilité dans la phase mobile et/ou de son affinité pour la phase stationnaire qui tend à le
retenir.

2) Dans un autre exercice on doit séparer des composés apolaires, aflatoxines.

On utilise 3 colonnes différentes : C18 ( 5µm , 150mm*4.6mm) ; C18 (3µm , 150mm*4.6mm) ; C18 ( 2.7*µm ; 100mm*4.6mm).

Sur quelles paramètres de la séparation ou de performance ces différences peuvent jouer ?

les 3 colonnes ont la meme phase stationnaire C18
entre la 1ère et la 2ème : la différence est la taille des particule, l'influence sera observée sur l'efficacité (largeur du pic)

entre les deux premières et la troisième: l'efficacité, temps de rétention