Chimie/biochimie- incompréhension d'un exercice

[Manou1306]

Bonsoir,
Cela fait plusieurs jours que j'essaie de comprendre un exercice, je n'y arrive toujours pas .. Si quelqu'un pourrait me donner un petit coup de main cela serait super

Voici l'énoncé :
Vous devez préparer le réactif de Bradford pour le dosage des protéines. le réactif est une solution aqueuse dont la composition est la suivante : Bleu de coomassie 0.01%, éthanol 4.75 % (V/V), acide orthophosphorique 1.46 M. Le bleu de coomassie doit être dissout dans l'éthanol avant une dilution en solution aqueuse. Le réactif sera utilisé ultérieurement pour le dosage des protéines dans 25 échantillons ( dilutions comprises) à l'aide d'une gamme étalon d'albumine de sérum de bovin comprenant 6 points de gamme d'étalon plus le blanc. L'ensemble des mesures sera fait en triplicata. La réaction colorée se fait en ajoutant 100 µl d'échantillon à 0.5 ml de réactif. la lecture d'absorbance est effectuée à 595 nm après 5 minutes d'incubation à température ambiante.

Produits disponibles :
- acide orthophosphorique: M : 98 g/mol ; liquide ; 85 % ; d:1.685
- bleu de coomassie : M:854.02 g/mol ; poudre
-Ethanol absolu : M : 46.07 g/mol ; liquide ; 99.8% ; d:0.789

Rédiger l'ensemble des données nécessaires à la réalisation de ce réactif.

Voilà voilà ...
Merci d'avance pour votre aide
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[Kemiste]

Bonsoir,

Merci de nous présenter ce que tu as fait (http://forums.futura-sciences.com/ch...ces-forum.html).

[Manou1306]

Ah pardon je n'avais pas vu cet article.
ce que j'ai fait :

- Calcul du volume final nécessaire : Vf : 0.5 x 3 x (25+6+1) = 48 ml soit 50 ml avec la verrerie du laboratoire.
- Bleu de coomassie :
C'est une poudre , il faut donc calculer une masse => m = cm x V
le bleu de coomassie est à 0.01 % soit 0.01 g/ 100ml ou 0.1g/L = cm

m = 0.1 x 50x10^-3
m = 5 mg
Cette masse doit être dissoute dans l'éthanol. je ne vois pas comment on peut savoir dans quelle quantité d'éthanol on doit mettre le bleu de coomassie. Puis on doit mettre le bleu de coomassie en solution aqueuse, je pense que l'on prélèvera 0.5 ml que l'on mettra dans la solution de 50 ml pour obtenir une solution à 0.01 %
_ Ethanol : 4.75 % (v/v) soit 4.75 ml/ 100 ml
=> pour 50 ml on a besoin de 2.375 ml
l'éthanol n'est pas complétement pur : 99.8 % de la densité d =0.789.
je ne vois pas comment utiliser la donnée de la densité de l'éthanol étant donné qu'ici nous avons seulement des volumes et non des masses volumiques.

Une partie de cet éthanol sera utilisé pour la dissolution du bleu de coomassie, il faudra donc soustraire ce volume au volume d'éthanol.
- acide orthophosphorique : On chercher un volume
cet acide est à 85 % : soit 85 % de 1.685 donc d =1.43
C1 = 1.46 M ;
C2 => cm(a) = 1000 x 1.43 =1430 g/l
=> C2 = 1430/98 = 14.59 M
V2 = 50 mL
donc C1xV1 = C2xV2 soit V1 = (14.59x0.05)/1.46 = 0.5 L . je ne pense pas que cette valeur soit possible.

Si on fait V2 = 1.46 x 0.05 / 14.59 = 5 ml. ce résultat me semble plus logique mais pour moi on cherche à prélever ce qu'il faut pour avoir 50 ml et non combien de 50 ml dois-je prélever ... je ne comprends pas trop ...
Voilà
merci,