Problème CCM

[Methanoate]

Bonjour à tous,

Je viens de réaliser une chromatographie sur couche mince d'un mélange de colorants alimentaires.

Je suis étonnée car certaines taches ne migrent pas verticalement sur la plaque mais forment une courbe ne me permettant pas de déterminer le rapport frontal des composés séparés. Voir pièce-jointe.

Quelque soit les précautions prises lorsque je plonge la plaque dans l'éluant, je me retrouve avec des taches complètement tordues...Sur dix essais, un seul chromatogramme était correct. Je précise que le fait de saturer la cuve n'améliore pas les résultats.

Que dois-je faire (ou ne pas faire) pour éviter ce problème ?

Merci
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[moco]

Bonsoir,
C'est un problème d'irrégularité géométrique. Soit le fond de ta cuve n'est pas plat, soit ta plaque est placée de biais dans cette cuve, soit tu fermes mal ta cuve et il y a des courants d'air, soit il y a un échauffement latéral imprévu, que sais-je ?

[Methanoate]

Bonjour Moco,

Le fond de la cuve est plat...celle-ci nous a coûté 350 euros...

Je pencherais plutôt par une introduction en biais de la plaque dans la cuve...mais je ne sais pas comment faire autrement...ma main ne peut pas rentrer entièrement dans la cuve pour déposer la plaque plus proprement. Je ne sais pas comment l'introduire en étant sure que le bord inférieur de la plaque est bien parallèle à la surface plane de l'éluant.

[Strade]

Bonsoir,

As-tu essayé de tenir ta plaque à l'aide d'une pince quelconque, ce qui te permettrait de la placer au fond de la cuve de manière perpendiculaire ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[shaddock91]

Bonjour. As-tu pensė à sėcher tes spots (sur la plaque ) avant l'ėlution ?

[Kemiste]

Bonjour.

As-tu essayé de couper les coins inférieurs de la plaque ?

[Methanoate]

Bonjour,

@Kemiste. Oui, sur les conseils d'un collègue, j'ai coupé les coins inférieurs de la plaque mais sur un essais (j'avoue qu'il faudrait en faire d'autres) cela n'a pas marché.

@shaddock91. Oui, j'ai laissé les spots sécher à l'air libre pendant 5-10 min afin d'évaporer le solvant toluène utilisé.

@Strade. Oui, j'ai utilisé une petite pince pour tenir la plaque mais cela reste malgré tout difficile de bien la plonger dans l'éluant. En fait que j'utilise mes doigts ou une pince, il m'est difficile d'aligner parfaitement le bord inférieur de la plaque avec la surface libre de l'éluant...Je fais ça un peu à l'aveugle et même en m'appliquant au mieux, il semblerait que la plaque plonge (même très légèrement) en biais dans l'éluant.

Pensez-vous qu'une cuve double comme celle-ci : https://fr.vwr.com/store/product/567...ent-double-bac
pourrait éviter ce problème ?

Merci

[Kemiste]

Pensez-vous qu'une cuve double comme celle-ci : https://fr.vwr.com/store/product/567...ent-double-bac
pourrait éviter ce problème ?

Des fois un simple pot de confiture fait l'affaire

As-tu essayé de faire une plaque plus large pour que les spots soient moins proches des cotés ?

[GrimpPhyto]

Salut!

Déjà, dans quel sens est ta ligne de spot? J'imagine qu'il est comme la ligne verte? Comment coupes tu tes plaques? Elle est droite en bas? En orange y'a une zone "boursouflée" qui peut expliquer une évaporation plus rapide de la plaque et donc cette courbe en noire. A voir sur tes autres plaques. Je pense que c'est plus un problème de préparation de plaque, que de cuve ou de saturation.

ccm.png

[Methanoate]

@GrimpPhyto. Oui la ligne de spot est comme la ligne verte sur la photo. J'utilise un guide en plastique pour aligner les spots.

Les plaques sont vendues telle quelle en petit format et je n'ai pas à les découper.

La boursouflure visible sur la photo est apparue lors de l'élution et n'était pas visible avant. J'observe le même phénomène de migration de travers sur des plaques tout à fait intactes.

[Methanoate]

Bonjour,

Je viens d'améliorer le développement des plaques CCM en découpant les coins de la plaque qui plonge dans l'éluant.

Les résultats sont beaucoup mieux car les composés migrent maintenant verticalement mais il y a un autre problème qui est apparu :

- auparavant, sans découpage des coins quatre composés du mélange étaient séparés (bleu1, rouge, bleu2 et jaune) (voir plaque 1 sur la photo)
- maintenant, après avoir découpé les coins, seulement deux composés de ce mélange sont séparés (bleu1 et jaune) (voir plaques 2 et 3 sur la photo)

Sur la photo, la plaque 1 montre la séparation lorsque les coins ne sont pas découpés (tache 1 : ref colorant bleu2 pur, tache 2 : mélange, tache 3 : ref colorant rouge pur)
Sur la photo, les plaques 2 et 3 montrent la séparation lorsque les coins sont découpés (tache 1 : ref colorant bleu2 pur, tache 2 : mélange, tache 3 : ref colorant rouge pur)

Auriez-vous idée de l'origine de ce phénomène ?

ccm2.jpg

[Kemiste]

Curieux en effet. As-tu fais migrer toutes tes plaques le même jour avec le même éluant ?

[Methanoate]

Bonjour Kemiste,

Le même éluant a été utilisé pour le développement des trois plaques. La plaque 1 a été développée il y a trois-quatre semaines et les plaques 2 et 3 ont été développées récemment il y a moins d'une semaine.

Les plaques sont conditionnées dans leur boîte et dans un placard sans dessiccateur. Ces plaques ne sont pas passées à l'étuve avant utilisation. Ce problème pourrait donc t-il venir de l'humidité éventuelle adsorbée sur la phase solide ? Cela aurait-t-il juste un effet sur une seule composante ?

[Kemiste]

Quand je demandais si c'était le même éluant je voulais savoir si c'était la même solution ou si elle a été refaite entre temps. Quel éluant utilises-tu ?

[Methanoate]

oui, il s'agit du même éluant (toluène). La même bouteille a été utilisée.

[GrimpPhyto]

Salut,

Tu utilises un mélange de solvants ou seulement du toluène comme éluant?

[Methanoate]

Bonjour GrimpPhyto

Je n'utilise pas de mélange de solvant. L'éluant est donc seulement du toluène.