Acide phosphorique dans le phase mobile pour HPLC

[cyril1201]

Bonjour à tous,
Je suis actuellement en stage dans le secteur HPLC afin d'effectuer une étude de stabilité sur un mélange de médicaments. Pour l'étude de la stabilité chimique j'ai mis au point une méthode HPLC permettant de séparer et quantifier mes molécules d'intérêt. La phase stationnaire utilisée est une colonne C18 et ma phase mobile, un mélange d'eau et d'acétonitrile en gradient. Le pH de la phase mobile a été mis à pH 2,5 par de l'acide phosphorique. L'acide phosphorique est selon la littérature l'acide le plus souvent utilisé dans cette gamme de pH et avec l'utilisation d'un détecteur UV. Mon maitre de stage me demande d'étoffer : pourquoi est-il le choix le plus préconisé ? Elle me met sur la piste du détecteur UV, je pense donc que l'acide orthophosphorique ne crée pas d'interférence avec celui-ci car il est invisible mais impossible de trouver des articles/review permettant d'appuyer mon intuition.
Je me tourne donc vers vous, vous êtes ma dernière chance ahahaha . Avez-vous des liens, sources qui permettent de répondre à cette question ?
Merci d'avance
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[sfnsfn2]

Bonsoir,
La première chose est sa transparence dans l'UV surtout si vous travaillerez à basse longueur d'onde.

La deuxième est que c'est un acide fort (par rapport aux acides organiques) ce qui nécessite une faible quantité pour ajuster un pH plus bas.

La troisième est que l'ion H2PO4- donne des pics plus symétriques et une plus grand efficacité.

La quatrième, c'est une question du temps de rétention (développement de la méthode).

J'allais dire le prix mais je pense pas.

[cyril1201]

Merci beaucoup pour cette réponse

[sfnsfn2]

Si tu veux allez plus loins, tu cherches :
- Hofmeister series in liquid chromatography
- Chaotropic and cosmotropic salts in liquid chromatography.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Kiraxel]

Cette discussion est intéressante

La quatrième, c'est une question du temps de rétention (développement de la méthode).

Pourquoi l'acide phosphorique diminuerait les temps de rétention ? S'il avait acidifié sa phase mobile avec du HCl ou du H2SO4, jusqu'à pH=2,5, les temps de rétention de ses molécules d'intérêts auraient été plus longs ?

[Kiraxel]

Elle me met sur la piste du détecteur UV

Est ce que cela ne serait pas lié aussi à une séparation des pics ? Peut être qu'un autre acide causerait un élargissement des signaux, diminuant la résolution de la méthode analytique, et qu'avec l'acide phosphorique on s'émancipe de ce problème...

Les optimisations de résolutions des pics sont souvent importants quand les molécules analysées se séparent mal.

[sfnsfn2]

Cette discussion est intéressante


Pourquoi l'acide phosphorique diminuerait les temps de rétention ? S'il avait acidifié sa phase mobile avec du HCl ou du H2SO4, jusqu'à pH=2,5, les temps de rétention de ses molécules d'intérêts auraient été plus longs ?

Je pense que je n'ai rien dit à propos d'une diminution du temps de rétention mais plutôt développement de la méthode. Le pH et la concentration seront optimisées pour répondre aux exigences imposées.
J'ai donné une piste, série de Hofmeister, effet chaotropique et cosmotropique.
Si t'as besoin de documents j'en ai beaucoup.

[Kiraxel]

Hey cyril1201, est ce que ton maître de stage t'a donné la réponse qu'il attendait finalement ?

[sfnsfn2]

https://pdfs.semanticscholar.org/da4...d4e7b1614e.pdf