Activité Enzymatique

[Louloutte10]

Bonjour à tous
(Je m'excuse d'avance pour les fautes )

Je viens vers vous pour vous demandez de l'aide car j'ai une question à faire dans mon TP que je ne comprend pas.
On me demande de calculer à l'aide de la loi de Beer Lambert et la valeur du coefficients d'extinction molaire la quantité de produit en micromoles par min.

J'ai la formule mais il y'a plusieurs choses que je ne comprend pas:
-pour le coefficient d'extinction molaire j'ai 3714 on me le demande en L.mol-1 et ensuite en m2.mol-1. Mais je ne comprend pas comment la convertir en L.mol-1 et en m2.mol-1 :/
-Ensuite pour déterminer la fameuse quantité de produit en micromoles/min je doit utiliser la fameuse loi de Beer Lambert et la valeur du coeff dans la même formule.

Comme formule j'ai : C= Absorbance / ε x L le tout x V
Mais quand je l'applique je ne trouve pas de résultats cohérant malgré l'utilisation de la formule et des données Je suis bloquée pour la suite du TP si je ne trouve pas cette fameuse valeur sachant que je doit ensuite l'appliquée sur d'autres valeurs

Merci d'avance à ceux qui pourront m'aider !
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[gts2]

Bonjour,

Si on avait le texte exact et complet, cela aiderait.

Pour le coefficient d'extinction molaire j'ai 3714 on me le demande en L.mol-1 et ensuite en m2.mol-1. Mais je ne comprend pas comment la convertir en L.mol-1 et en m2.mol-1

C'est normal vos deux unités ne sont pas cohérentes, m²/mol est l'unité Si et l'unité pratique est L/mol/cm, c'est cela que vous voulez dire ? 3714 en quelle unité ?

Ensuite pour déterminer la fameuse quantité de produit en micromoles/min

Pour obtenir des minutes, il faut une donnée temporelle, laquelle avez-vous ? Vu l'unité ce n'est pas une quantité de produit, mais une vitesse de réaction.

Comme formule j'ai : C= Absorbance / ε x L le tout x V

De nouveau ce n'est pas cohérent : c=A / ε x L ; il n'y a pas de volume. (à moins que C ne soit pas la concentration)

[Louloutte10]

Bonjour
Je cite la question " Suivant l'équation de la courbe obtenue, en déduire la valeur du coefficient d'extinction molaire de l'oNP. Exprimer le résultat d'abord en L;mol-1.cm puis ensuite en m2.mol-1."
Cette question me pose soucis puis la suivante également la fameuse " Déterminer pour chaque condition de température ( 0 , 30 , 37, 70° C ) la quantité d'oNP produit en micromoles/min en utilisant la loi de Beer Lambert et la valeur du coefficient d'extinction molaire de l'oNP déterminé précédemment."

Vous me dites que la formule n'est pas cohérente mais la prof veux que l'on utilise la Loi de Beer Lambert en la combinant avec le C=n/v j'ai écrit la formule C= A/ ε x L x V et elle m'a dit que c'était bon.
Mais s'il n'y a pas de volume de quoi parle t'elle ? Honnêtement je ne vois pas et je ne comprend pas ^^'

L'équation obtenue est : y=3417 x -0.0096
R²= 0.9992
Sachant que la prof m'a dit Abs= a x c + b

[Louloutte10]

Et aussi que la fameuse courbe A=f ( C(oNP, volume total) )

[A voir en vidéo sur Futura]

[gts2]

Avec les données complètes et correctes (cette fois l'unité de ε est presque la bonne) c'est mieux.

Vous avez étudié A(c) et donc la pente de 3417 n'est pas le coefficient d'extinction molaire.
D'après Beer Lambert donc en L/mol, pour obtenir le coefficient d'extinction molaire, il faut donc connaitre la longueur de la cuve.
Ceci étant je ne vois pas trop l'intérêt de calculer ε puisque A(t) vous donne c(t), mais cela va vous obliger à jongler un peu avec les unités de longueur. Pour obtenir ε en SI, il faut vous donc convertir L en m3 (soit ?) et cm en m(soit ?) et des m³/m donne bien des m².

Si vous avez c(t) vous pouvez obtenir la vitesse volumique dc/dt et il suffira de multiplier par le volume pour obtenir la vitesse dn/dt

[gts2]

Et aussi que la fameuse courbe A=f ( C(oNP, volume total) )

On n'a toujours pas d'indication temporelle, comment voulez-vous trouver une vitesse sans avoir un temps quelque part.
Donner le texte complet.

"la Loi de Beer Lambert" en la combinant avec le c=n/V donne n= A/ ε x L x V et pas c.

[Louloutte10]

Mais justement ce que je ne comprend pas c'est que c'est ma prof qui m'a dit que le fameux 3714 est la valeur du coefficient d'extinction molaire.

Je comprend rien du tout ça m'énerve entre ceci cela je me perd et je comprend rien

Dans ma fiche technique avec les fameuses températures c'est écrit:
' Introduire 1,4 mL d'ONPG à 2.5 mmol.L-1 dans 6 tubes différents , le tube 1 on le met à 0° , le tube 1 au bain marie à 30° le 2 -ème à 37° et le 3 -ème à 70° et laisser le 5eme et 6eme a température ambiante pendant au moins 5min.
- ajouter 100 µl de solution enzymatique β- galactosidase dans le premier tube (t=0) puis de même 20 sec exactement plus tard dans le tube n°2 et ainsi de sites toutes les 20 secondes jusqu'au tube n°5.
- ajouter (20 sec plus tard) 100 µl de tampon phosphate dans le tube n°6.

- A t=2min ajouter 1ml de Na2CO3 à 1mol.l-1 dans le premier tube puis de même dans les autres tubes toutes les 20 sec de façon à ce que le temps de réaction soit 2 min pour chaque tube. Bien homogénéiser chaque tube puis lire les absorbances à 415nm."

Voila le protocole de la manip avec les temps concentration etc. J'ai du faire la même chose mais cette fois avec le pH optimum. Avec les absorbances j'ai fait la fameuse pente et maintenant j'ai ce fameux soucis de calcul avec le 3714 et la loi de Beer Lambert

J'essaie de comprendre désolé ^^'

[gts2]

Une explication possible est que votre cuve ait une longueur de 1cm (mais cela n'a jamais été indiqué) et donc ε x L =3714 L/mol donne ε=3714 L/mol/cm

Donc le pb Beer-Lambert est réglé (à condition de lire entre les lignes), bien que je n'ai toujours pas compris l'intérêt de la détermination de ε.

"le temps de réaction soit 2 min" : on l'a notre donnée temporelle ! (je suppose, toujours l'imprécision du texte, que l'ajout de Na2CO3 est une trempe/arrêt de la réaction).

Vous faites une mesure de vitesse avec un seul point ! Je suppose donc (il faut beaucoup supposer) qu'à t=0 l'absorbance est nulle au vu des espèces en solution. Je suppose (encore) que 2 min est court de manière à assimiler dA/dt à A/t
En notant k votre 3714, on a donc : et donc .

[Louloutte10]

Je n'ai pas compris non plus l'intérêt de déterminer ε.
Le mieux pour toutes les imprécisions serait de voir le sujet entièrement , s'il le faut j'écris tout le sujet lol.

Ma 1ere fiche technique c'est le tableau de la gamme d'étalonnage avec le n° des tubes , la quantité d'ONP à 1mmol.L-1(mL) dans chaque tubes ; ED ( mL) , la solution tampon , le Na2CO3 à 1 mol.L-1(mL) ; la quantité d'onp (µmol); C(oNP,volume total) (mol.L-1) et la fameuse absorbance pour chaque tube à 415 nm.

Je pense aussi que l'ajout de Na2Co3 est l'arrêt de la réaction.

Donc pour votre calcul dn/dt= Va/kt le k=3714 est en micromoles/min ???

[gts2]

Le mieux pour toutes les imprécisions serait de voir le sujet entièrement , s'il le faut j'écris tout le sujet.

L'écrire non, mais si vous avez le sujet sous forme pdf vous pouvez le mettre en pièce jointe.

Les imprécisions proviennent peut-être aussi du contexte : il est "évident" que A(t=0)=0, il est "évident" que 2 minutes est un temps court, il est "évident" que la cuve fait 1cm ...

Donc pour votre calcul dn/dt= V A/kt le k=3714 est en micromoles/min ???

On a déjà dit que k=3714 L/mol ; c'est dn/dt qui est en moles/min si t=2 min bien sûr.

[Louloutte10]

Bon j'ai fait comme je l'ai pu pour faire le pdf via des photos si vous avez des nouvelles je suis à votre écoute.

J'espère que ça ira

[gts2]

Oui, on peut lire le pdf

Cela confirme un certain nombre de supposés :
- A(t=0)=0 : Q1 et à 415 nm la courbe rouge de la page 5 est bien à zéro
- trempe par ajout Na2CO3 : milieu de la page 4 : enzyme inactive pH>11

Par contre
- longueur de cuve 1 mm non trouvée, mais c'est la longueur classique
- je suppose que dA/dt=A/t est un implicite du au contexte : étude enzymatique, donc mesure de la vitesse initiale (pour Michaelis) donc intervalle de temps court.

[Louloutte10]

D'accord merci
Du coup ce que vous m'avez dit plus haut semble cohérant ?

Je crois la cuve fait 1cm.

[gts2]

Le message #8 me parait cohérent.

[Louloutte10]

D'accord merci beaucoup de votre aide