Microbiologie : croissance bactérienne

[invite0475b54c]

Bonjour,

J'ai un petit problème car j'ai effectuer un Tp sur la croissance bactérienne d'escherichia coli, on me demande de tracer la courbe Log de l'absorbance de la biomasse en fonction du temps mais en fonction de mes résultats si je fait les calculs tous mes points sont négatifs. Du coup je ne sais pas comment trouver la biomasse.

voici mes données :

Temps Absorbance biomasse
pour t=0 on a A= 0.012
pour t=30 on a A=0.049
pour t=60 on a A=0.055
pour t=150 on a A=0.095
pour t=180 on a A=0.123
pour t=210 on a A=0.171
pour t=240 on a A=0.204
pour t=270 on a A= 0.214
pour t=300 on a A= 0.220

Pourriez-vous m'aider ?
merci
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[invite6b67c82a]

quelle est la question posée exactement. ce n'est pas parce que les valeurs de log sont négatives que cela empêche de calculer.

[invite0475b54c]

En fait, je ne sais pas comment convertir l'absorbance en biomasse.
Je ne vois pas la relation qui existe entre les deux.

[invite6b67c82a]

Pour faire une relation entre la biomasse et l'absorbance, c'est un peu fastidieux. cela ne peut se faire qu'expérimentalement et pour chaque espèce bactérienne. On prépare des cultures et on en mesure l'absorbance ensuite on récupère par centrifugation les bactéries et on les fait sécher. Ensuite on établit une correspondance entre la masse de bactéries séchées et l'absorbance mesurée. Avec les absorbances que vous avez sur la cinétique de croissance il faut parfois plusieurs litres de culture pour mesurer une masse sèche.
Si la question portait sur l'augmentation de la biomasse sans chercher de valeur absolue, la réponse serait:
appliquant la loi de Beer-Lambert qui donne Absorbance = klC
ou k est un coefficient fixe pour une espèce l la largeur de la cuve du spectro, ces deux valeurs sont constantes
A est donc proportionnel à C: la concentration bactérienne ou biomasse.
Le rapport A2/A0 (A2 Abs à 2heures par exemple etA0 Abs au temps 0 )vous donne le rapport entre la biomasse finale et initiale.
C'est tout ce que je peux vous dire, si vous n'avez pas d'autres informations sur la correspondance Abs et biomasse.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite0475b54c]

Merci cela m'aide déja beaucoup.

[invitea75122dd]

salut
ne cherche pas trops trace ta courbe densité optique versus temps puis par l'excel applique une transformation logarithmique et tu aura ta courbe dont tu pourra resortir temps de generation taux de croissance et autre
merci

[Bertrand]

Personnellement je ne pense pas que tu puisse tirer grand chose de ta courbe. Tu t'es arrêté trop tôt dans la prise de mesures, tu n'est pas encore dans la phase exponentielle de croissance. E. coli donne de très belles courbes en 3 à 4 heures. Il aurait fallu réaliser une pré-culture à 37°C sous agitation pendant la nuit afin de minimiser le temps de la phase de latence.

[Bertrand]

Pour évaluer ta biomasse, je propose le protocole suivant.
Laisse pousser une culture de 50 mL à une D.O. comprise entre 1,5 et 2 (au-delà, il y aura encore croissance mais la culture est trop dense pour que le spectrophotomètre puisse mesurer quelque chose).
Réalise une série de dilutions en base 10 jusqu'à 1E-15 dans du MgSO4 afin de mesurer le titre de la culture à D.0. 2 exprimé en UFC/mL. Pour déterminer le titre, tu déposera sur une gélose deux gouttes de 10 µl pour chaque dilution de 1E00 à 1E-15. Divise ta gélose en secteurs pour bien isoler chaque goutte. La concentration en cellules diminuera proportionnellement jusqu'à ce qu'elles puissent être comptées. Si, par exemple la dilution 1E-9 donne une moyenne de 3 colonies, la concentration initiale sera de 3E(9+2). Explication : à la dilution 1e-9 (1 mL) tu prélève 10 µl soit 1/100. Dans ce tube la cencentration est de 3 fois 100 bactéries = 300. Le tube initiale contenait 300 fois 1E-9 batéries.
Ensuite réalise une série de dilution de ta culture à D.O. 2 selon le tableau suivant :
Culture mère (mL) MgSO4 (mL)D.O. attendue
10 0 2,0
7,5 2,5 1,5
5 5 1
4 6 0,8
3 7 0,6
2 8 0,4
1 9 0,2
0,5 9,5 0,5
0,25 9,75 0,25
0,10 9,9 0,10

Il ne reste plus qu'à établir le graphique de la D.O. en fonction de l'UFC/mL.

Cette courbe te permettra d'étalonner la courbe que tu as obtenu plus haut.
Elle te donne le nombre de bactéries par mL pour une D.O. donnée. Sachant que pour E. coli il faut 2 millards de bactéries pour obtenir 4 mg de poids frais ou 1 mg de poids sec.

[Bertrand]

Désolé pour la mauvaise lisibilité du tableau, les espaces que j'avais mis on été automatiquement supprimés lors de la mise en ligne.