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protéine permettant de normaliser un western blot



  1. #1
    ninoo1282

    protéine permettant de normaliser un western blot

    bonjour,


    Je travaille actuellement à quantifier des protéines sur western blot et pour celà j'ai besoin d'une protéine me permettant de normaliser!!!! J'ai utilisée l'actine (il y en a probablement la même quantité dans outes les cellules mais mes résultats me semblent un peu érronné je voudrais donc savoir si quelqu'un utilise un normalisateur d'equerre pour ce genre de manip!!!!????
    Merci

    -----


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  3. #2
    Vinc

    Re : protéine permettant de normaliser un western blot

    Salut!
    Qu'est ce que c'est que tu détectes comme protéine?? Sinon oui il y a l'actine mais ça dépend aussi de ce que tu veux voir! Par exemple quand je veux suivre Erk phospho, je normalise avec Erk total...
    Sinon j'utilise aussi la béta caténine...

    A+
    Vinc
    Primum non nocere.

  4. #3
    ninoo1282

    Re : protéine permettant de normaliser un western blot

    je détecte une protéine du cytosquelette plus particulièrement du sarcomère: la calpaine 3, et ce que je crains c'est la variabilité de cette actine en tant que normalisateur , je ne peux pas non plus utiliser comme toi "erk total" ça ne s'appliquerait pas à la calpaine 3, je vais tester labéta caténine et la desmine! Merci

  5. #4
    Vinc

    Re : protéine permettant de normaliser un western blot

    Salut!
    Oui en effet si tu étudies la calpaïne je te déconseille fortement de normaliser à l'actine.... Pour la desmine c'est pareil, c'est du filament intermédiaire donc du cytosquelette alors je ne sais pas si c'est très judicieu de rester dans un contexte cytosquelettique, moi j'essairai de changer complètement, mais bon je ne connais pas ton sujet, donc peut_être que tu as l'habitude d'utiliser ça pour normaliser et peut-être que ça marche!
    Sinon tu peux utiliser une enzyme du métabolisme style la NADPH! Mais Erk total doit fonctionner aussi!

    A+
    Vinc
    Primum non nocere.

  6. #5
    Yoyo

    Re : protéine permettant de normaliser un western blot

    Pour normaliser tu pourrais prendre une protéine ribosomale ou eEF1A qui est une protéine hyperabondante et dont l'expression ne varie pas.
    yoyo

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    gankam

    Re : protéine permettant de normaliser un western blot

    Citation Envoyé par Vinc Voir le message
    Salut!
    Qu'est ce que c'est que tu détectes comme protéine?? Sinon oui il y a l'actine mais ça dépend aussi de ce que tu veux voir! Par exemple quand je veux suivre Erk phospho, je normalise avec Erk total...
    Sinon j'utilise aussi la béta caténine...

    A+
    Vinc
    Salut Vic je suis un doctorant cherchant a caracteiser les voies de signalisation cellulaire dans un modele experimental de SEP
    je cherche des anticorps des MAPK qui fonctionnent bien.( ERK, P38 et JNK) tu as des tuyaux ?

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  10. #7
    gankam

    Re : protéine permettant de normaliser un western blot

    Citation Envoyé par gankam Voir le message
    Salut Vic je suis un doctorant cherchant a caracteiser les voies de signalisation cellulaire dans un modele experimental de SEP
    je cherche des anticorps des MAPK qui fonctionnent bien.( ERK, P38 et JNK) tu as des tuyaux ?
    je souhaite evaluaer l expression de ERK et phospho ERK . (JNK et p-JNK, P38 et P-P38)
    Mais il y'a tellement d'anticorps dans le commerce et mon labo n'a pas bcp de sous.
    Je commence dans le western et je voudrais savoir lesquels ont le meilleur rapport qualité prix.
    merci de ta reponse rapide t'as une emal directe?
    JE bosse en belgique ( Labo de recherche sur le métabolisme hydromineral)

  11. #8
    Vinc

    Re : protéine permettant de normaliser un western blot

    Salut!
    En ce qui concerne Erk total j'utilise celui de chez UPSTATE en rabbit, qui fonctionne très bien (ref
    Pour P-Erk, j'utilise en routine le Cell Signaling (clone E10) en mouse (ref: 9106L), qui fonctione parfaitemment également. Les 2 au 1/1000 en PBS-TL.

    Pour p38 et Jnk il faut que je retrouve les refs, mais ceux qu'on a fonctionnent très bien! J'essaye de te dire ça dans la journée...

    V.
    Primum non nocere.

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