bonjour,
voila je vloque sur une petite question concernant des annales de microbiologie donc si quelqu'un pouvait me venir en aide
je dispose d'un plasmide comportant une cassette de clonage avec les sites de restriction spécifiques à
- Bam H1
-EcOR1
- Xho1
- Hind IIII
Le gène que je souhaite intégrer au plasmide comprend
- 2 sites de coupure BamH1
- 1 site de coupure HindIII
(dans l'ordre suivant, Bamh1, HindIII, BamH1)
mais aucun site ECoRI et ni Xho1
1) Quels sont les sites devant être présents aux 2 extrémites du gène pour pouvoir réalise le clonage?
j'ai répondu que les sites de restriction devaient être soit
- EcoRI et EcoRO
- XhoI et XhoI
ou - EcoRI et XhoI
en effet , en utilisant BamH1 ou HindIII, on entrenerait une fragmentation de notre gène
2) si vous coupez votre plasmide recombinant par bamhI combien de fragments observerez vous?
je bloque sur cette question
d'apres la question, le gène a bel et bien été intégré dans le plasmide bien qu'il fut fragmenté
par conséquent les 2 sites BAMHI du gène ont été coupés et la portion entre ces sites a disparu (le site HindIII notamment)
par conséquent sur notre plasmide, il ne reste que 2 sites bamH1 provenant de la coupure du site bamH1 present au début.
donc si on coupe ces 2 sites, on obtient logiquement 2 fragments de plasmide
cependant, dans le corrigé il est indique qu'on obtient 3 fragments et je ne vois pas pourquoi
si quelqu'un voulait bien m'expliquer ou se situe mon erreur, merci
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