[Exercice] Clonage d adn dans un plasmide
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Clonage d adn dans un plasmide



  1. #1
    invite0c2bc4db

    Cool Clonage d adn dans un plasmide


    ------

    bonjour tout le monde

    j ai une petite question qui vient d un exercice et que je n arrive pas a resoudre (biensûr j ai pas le corrigé!!!!!!!!)

    voilà on a cloné de l adn g dans un plasmide pbr322 et on voudrait savoir comment le récupérer???

    en fait comment fait on pour séparé le fragments clonés de l adn plasmidique???

    -----

  2. #2
    invitef93eb190

    Re : clonage d adn dans un plasmide

    avec des enzymes de restriction ....
    les mêmes que celles utilisées pour l'intégration de l'ADN dans le plasmide

  3. #3
    invite0c2bc4db

    Re : clonage d adn dans un plasmide

    merci merci
    mais comment on sait lequel est lequel???
    on fait une hbridation moléculaire???du coup il faut connaître la séquence de l adn a cloner??????

    mais après comment sort-on cet adn de la cellule, en fait je comprends pas comment on récupère le fragment cloné???

    si on lyse la bactérie, on aura deux types d adn l adn plasmidique l adn genomique et l adn du fragment comment faire pour ne recuperer que l adn du fragment?????

    c est pas clair dans ma tête
    lol
    merci

  4. #4
    invitef93eb190

    Re : clonage d adn dans un plasmide

    En fait, comme tu dis, il faut faire une lyse des cellules.
    Puis tu digères les ADN par les bonnes enzymes de restriction.
    Enfin tu réalises une électrophorèse puis tu récupères les bandes correspondantes à ton fragment d'ADN (si tu connais la taille du fragment que tu clones).

    Si tu ne connais pas la taille du fragment, ou si tu veux une meilleure purification, il existe des protocoles de purification des ADN plasmidiques : tu récupères uniquement l'ADN plasmidique.
    Puis digestion, et enfin électrophorèse.

    Je sais pas si c'est plus clair comme ça.

    PS : je peux te donner plus d'infos sur la purification des plasmides (après avoir retrouvé le protocole de mes TP.....) si tu veux

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    invite0c2bc4db

    Smile Re : clonage d adn dans un plasmide

    je te remercie c est parfait

    maintenant c est bien plus claire dans ma tête et je te remercie mille fois........;


  7. #6
    invitebd27bf8a

    Cool Re : Clonage d adn dans un plasmide

    Bonjour à tous,

    Ma réflexion se porte sur le choix de l'enzyme de restriction (ER) (en rapport avec exercice en pièce jointe).
    Selon moi, le choix de l'ER se porte:
    - sur la fréquence de coupure
    - sur obtention d'un site de restriction compatible avec le plasmide
    - le faite que le site soit présent en un seul exemplaire sur le plasmide
    - et que ce site se situe uniquement sur l'une des régions de résistance (AmpR ou TetR)

    D'office, j'éliminerai l'ER:
    - AfeI (car présent en 2 exemplaires)
    - EcoRI (car situé en dehors des régions de résistance)
    - CaiI, SbfI et SwaI (car probabilité de coupure trop faible: 1 site tous les 262kpb pour CaiI et 1 site tous les 65,5kpb pour SbfI et SwaI)

    Je sais que l'on peut utiliser plusieurs ER tant que leur site est compatible. Mais maintenant, comment dois-je procéder pour le(s) choisir sachant que je ne connais pas la taille de l'ADN génomique ?

    Merci d'avance l'aide!

  8. #7
    piwi

    Re : Clonage d adn dans un plasmide

    Vous avez oublié de joindre la carte de restriction.

    Question alternative: Est ce que l'on est vraiment sur un niveau pré bac? Ca risque de faire peur aux enfants là!
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  9. #8
    invitebd27bf8a

    Re : Clonage d adn dans un plasmide

    L'exercice correspondant à mon post est un pièce jointe.
    Images attachées Images attachées  

  10. #9
    invitebd27bf8a

    Re : Clonage d adn dans un plasmide

    Citation Envoyé par piwi Voir le message
    Question alternative: Est ce que l'on est vraiment sur un niveau pré bac? Ca risque de faire peur aux enfants là!
    Oups! En faite c'est du niveau L2... Désolée.

  11. #10
    invitebd27bf8a

    Re : Clonage d adn dans un plasmide

    Je vais reposter dans la bonne catégorie.

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