J'ain un problème avec ma PCR

[invitecfcf6281]

Salut à tous, j'espère que quelqu'un pourra m'aider à résoudre un casse tête de dernière génération avec ma PCR.
alors voilà.
Depuis 3 ans je fais exactement la même nested PCR sur de l'ADN humain et jusqu'à présent elle marchait très bien.
mais là j'obtiens des résultats bizarres.
1) soit mon gel est complètement vide excepté le marqueur
2) soit j'obtiens des résultats différents avec à chaque fois des échantillons différents qui s'allument.

j'ai fais de nouvelles préparations de dntp, amorces (un ancien lot certes)
mais rien n'y fait.

j'ai pensé à un problème avec les amorces que je vais recommander, ou l'enzyme (j'ai un stock neuf).

mais vu que tout ceci a toujours bien marché et que je n'y ai rien changé je suis un peu largué.

Quelqu'un aurait il une idée qui pourrait m'aider à avancer??
merci à tous
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[invite71f23525]

Bonjour et bienvenue sur Futura,

Le mieux dans ces cas là est de repartir sur du neuf pour absolument tout, sinon vous allez perdre du temps à tâtonner pour trouver le problème. En effet, si les concentrations en sels du tampon varient, si l'activité spécifique de la polymérase a décrue, si les amorces sont dégradées ou si la matrice est contaminée, vous aurez parfois des amplifications mais tout de même la manip sera très instable. Ca marchera une fois sur dix. Donc n'hésitez pas à repartir avec du neuf.

Greg

[invitecfcf6281]

merci greg, je penche aussi pour cetet option là. repartir sur du neuf. je vous tiendrai au courant

[invitef08e6467]

C'est pour toutes ces raisons que l'on appelle cela de la biologie magiculaire.... Des fois ça marche et des fois ça marche plus sans raisons (ou presque).

J'opterais moi aussi pour le retour à la case départ avec tout neuf (sauf si vous voulez savoir d'où viens le soucis, à ce moment là il vous faut garder les anciens produits et n'en changer qu'un seul à la fois, mais c'est long et fastidieux).

[A voir en vidéo sur Futura]