Enzymes de restriction sur plasmides- Digestion complète et incomplète
Quel est la différences entre une digestion complète et incomplète, et comment prévoir le nombre de fragments dans le cas d'une digestion incomplète ??
Par exemple, pour un plasmide ayant 3 sites de coupures, le nombre de fragments attendu (théorique) est de 6 si l'on considère tout les fragments possible et imaginable. Mais dans le cas d'une digestion incomplète, comment savoir s'il y aura 1 seul site ou 2 site qui seront impliqué dans la digestion du plasmide ?
Merci d'avance !
La digestion incomplète est une digestion qui n'est pas efficace sur l'ensemble des molécules du substrat. Exemple : la moitié des plasmides sont digérés, l'autre moitié est intécte. Elle se produit quand l'enzyme n'est pas bien dosée, qu'elle n'est pas très active, que la température ou le tampon ne sont pas bien ajustés, ... bref, pour tout un tas de raisons. Et comme on ne maitrise jamais parfaitement chacun de ces paramètres, on ne peut pas non plus prévoir si la réaction sera complète ou non. Surtout si plusieurs enzymes différentes sont utilisées pour chacun des sites. Après, si on fait un électrophorèse, on peut quantifier l'avancement de la digestion pour chacun des sites, car en général, les différents fragements n'ont pas la même taille.
Josquin
bonjour;
dites moi svp comment peut on trouver le nombre de fragments d'ADN produits lors d'une double digestion du plasmide "pCR-gai" par les enzymes de restriction HindIII et EcoRI et leurs tailles respectives?
sachant que pCR-gai est un plasmide d’environ 5500 pb qui contient la séquence codante du gene GAI (1579 pb), et le nombre de sites de restriction de HindIII est 2 et EcoRI est 2 par molécule
aussi je cherche a savoir comment trouver la taille du vecteur pSK (environ 2900 pb) abres la double digestion par ces deux mêmes enzymes.
merci d'avance
