Intégration ADNc

[invite49ab4960]

Bonjour,

je ne comprends pas pourquoi le fait d'utiliser deux enzymes de restriction lorsque l'on veut insérer un ADNc dans un plasmide permet de contrôler le sens d'intégration de cet ADNc.


Merci
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[invite853321bf]

Les enzymes de restriction coupent des sites spécifiques, en laissant des sites coupés spécifiques de chaque enzyme. Si les sites sont semblables, il peut donc y avoir jonction. C'est comme cela qu'on insère un gène.
Maintenant si tu coupes les deux bouts avec la même enzyme, tu auras des deux côtés les mêmes sites donc ton brin pourra s'insérer dans n'importe quel sens. En coupant avec deux enzymes, on a un site spécifique pour chacun des bouts, on peut donc décider dans quel sens sera intégré le morceau d'ADN dans le plasmide

[invite49ab4960]

On coupe l'ADNc seulement avec les 2 enzymes ? Ou le plasmide ? Ou les 2 ?

Désolé je suis un peu perdue....!

[Edelweiss68]

Bonjour,

Je crois bien que c'est les deux pr générer des extrémités cohésives (pas tout le temps) et que ça puisse s'assembler mais à confirmer!

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite49ab4960]

Merci!
Quelqu'un peut confirmer ?

[invite30157012]

Je confirme,
Même si tu peux aussi couper ton plasmide avec une ou 2 autres enzymes qui génèrent des extremités cohésives compatibles avec celles de ton insert. C'est-à-dire que tu peux avoir un site de restriction reconnu par une enzyme différente mais une fois la coupure faite, l'extremité genérée est compatible avec celle de ton enzyme.
Cordialement.