problème de précipitation de DMSO dans milieu de culture

[inviteba43eddb]

Bonjour à tous

J'utilise un inhibiteur d'AMPK préparé dans du DMSO à 10mM pour traiter des cellules HMEC dans des plaques 12 puits. Je ne mets que 2µL de produit pour 500µL de milieu mais lorsqu'il entre en contact avec le RPMI il précipite automatiquement (les cristaux sont bien visibles au microscope). Quelqu'un a-t'il déjà eu ce problème, est-ce la faute du DMSO, faut-il diluer avec du PBS avant de rajouter au milieu de culture ? Je ne sais pas quoi faire, merci pour votre aide si quelqu'un a une solution.
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[inviteb6144ea4]

Bonjour,

le DMSO cristallise dans un milieu froid. Ton RPMI est -il à 37°C? Si tu le sors juste du frigo à 4°C il est possible que le DMSO cristallise. (c'est juste une suggestion)

Cordialement

[vpharmaco]

Le probleme vient probablement de ton inhibiteur, qui est peu soluble dans l'eau (ce n'est pas le dmso qui précipite, c'est l'inhibiteur). Il ne te reste plus qu'à essayer d'augmenter le pourcentage de DMSO (par ex, ajouter 5 uL d'une solution 4 mM, 100% DMSO), en esperant que tes cellules ne soit pas trop fragiles (tres variable suivant les lignées. ).