Bonjour,
Je travaille actuellement (enfin depuis un moment) sur une protéine capricieuse... J'ai dut la purifier en conditions dénaturantes et je suis actuellement entrain d'essayer de juger de l'efficacité de la renaturation.
Malheureusement les données en CD sont inexploitables (pour une raison inconnue), les données en UV montrent qu'il y a repliement-dépliement (ce qui laisse penser que la protéine est au moins repliée)...
Afin d'obtenir plus d'informations j'ai voulu me baser sur un test fonctionnel car ma protéine est sensée dimériser avec une autre. J'ai tenté d'observer la dimérisation par tamis moléculaire, gel non-dénaturant et agents couplant mais rien n'y fait (sans doute que la dimérisation ne se produit que dans le milieu cellulaire après des modifications post-traductionnelles)...et surtout les résultats ne permettent pas de conclure si il y a oui ou non dimérisation.
La seule chose sur laquelle je pense me pencher c'est la capacité de ma protéine à lier les protéines phosphorylées. Je me demandais s'il existait déjà des kits d'activité de ce genre? Par exemple pour révéler des interacteurs de kinases ou autre?
Merci d'avance de votre réponse
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