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Extraction plasmidique rôle des buffers



  1. #1
    petitelectron

    Unhappy Extraction plasmidique rôle des buffers


    ------

    Bonjour,
    Je ne comprends pas le rôle du tampon QBT que l'on met pour équilibrer la colonne d'affinité, que fait il exactement??
    ainsi que le rôle du tampon QC, QT et TE?? pourquoi autant de tampons différents?
    voilà ce que j'ai fais en tp: j'équilibre une colonne d'affinité avec du QBT, je mets ma solution avec mes plasmides dedans, je rajoute du QC, puis j'élue l'ADN avec un tampon QT, je fais précipiter l'ADN en y ajoutant de l'isopropanol, on passe à la centri, on récupère le culot qu'on redissout dans du tampon TE...
    Je comprends pas ce qui se passe tt au long de cette manip..?? Si quelqu'un peut m'expliquer.
    Merci

    -----

  2. #2
    Yoyo

    Re : Extraction plasmidique rôle des buffers

    salut
    1_ tu resuspends tes bactéries
    2_ tu les lyses (lyse alcaline)
    3_ tu passes le lysat sur une colone, pour y accrocher ton ADN
    4_ tu laves la colone pour détacher tout ce qui est accroché apsecifiquement
    5_ tu élues ton ADN.

    YOyo

  3. #3
    petitelectron

    Re : Extraction plasmidique rôle des buffers

    oui mais dans ce cas là à quoi ca sert de mettre le QBT dans la colonne avant le lysat??
    et tous le reste!! visiblement il y a beaucoup plus d'étapes!

  4. #4
    Yoyo

    Re : Extraction plasmidique rôle des buffers

    salut

    cela sert a équilibrer la colone en sels, et a la réhydrater par la meme occasion.
    L'ADN sera ainsi dans les bonnes conditions salines pour s'y fixer.

    tu trouveras tous les details dans la notice du kit sur le site de qiagen.

    YOyo

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