Extraction plasmidique rôle des buffers

[petitelectron]

Bonjour,
Je ne comprends pas le rôle du tampon QBT que l'on met pour équilibrer la colonne d'affinité, que fait il exactement??
ainsi que le rôle du tampon QC, QT et TE?? pourquoi autant de tampons différents?
voilà ce que j'ai fais en tp: j'équilibre une colonne d'affinité avec du QBT, je mets ma solution avec mes plasmides dedans, je rajoute du QC, puis j'élue l'ADN avec un tampon QT, je fais précipiter l'ADN en y ajoutant de l'isopropanol, on passe à la centri, on récupère le culot qu'on redissout dans du tampon TE...
Je comprends pas ce qui se passe tt au long de cette manip..?? Si quelqu'un peut m'expliquer.
Merci
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[Yoyo]

salut
1_ tu resuspends tes bactéries
2_ tu les lyses (lyse alcaline)
3_ tu passes le lysat sur une colone, pour y accrocher ton ADN
4_ tu laves la colone pour détacher tout ce qui est accroché apsecifiquement
5_ tu élues ton ADN.

YOyo

[petitelectron]

oui mais dans ce cas là à quoi ca sert de mettre le QBT dans la colonne avant le lysat??
et tous le reste!! visiblement il y a beaucoup plus d'étapes!

[Yoyo]

salut

cela sert a équilibrer la colone en sels, et a la réhydrater par la meme occasion.
L'ADN sera ainsi dans les bonnes conditions salines pour s'y fixer.

tu trouveras tous les details dans la notice du kit sur le site de qiagen.

YOyo

[A voir en vidéo sur Futura]