phenol:chloroforme bizarre?

[invite7b1c9092]

Bonsoir!
Ca fait très très longtemps que je n'ai plus fais d'extraction P:C, et étant en thèse à l'étranger, je n'ai pas mes anciens TP sous la main.
J'ai cherché sur internet, et j'en ai trouvé 2, dont un que je trouve bizarre. Les voici brièvement

1- Ajouter phe:chl: isoamyl. à l'achantillon, mélanger, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Y ajouter du chl, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Précipiter l'ADN

2- (le bizarre) Ajouter le phe, mélanger, centrifuger, et prelever la phase aqueuse. Ajouter chl:isoamyl. et précipiter (c'est la que ca coince, non?)

Vous en pensez quoi?
merci
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[Flyingbike]

cela dépend de quoi on part, et du degré de purification que l'on souhaite.

Ainsi, il n'est pas rare de faire des extractions successives, par exemple phénol/chloroforme, puis chloroforme seul... etc.

[invite7b1c9092]

mais on ne fini pas toujours pas une centri pour se débarasser du chloroforme?
Ou on s'en débarrasse très bien en précipitant l'ADN?

[Flyingbike]

ah si, en effet. Il faut toujours (a ma connaissance) prélever la phase aqueuse avant précipitation.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite7b1c9092]

ok, j'en conclue qu'il manque une étape à ce deuxième protocole!