Erk Total

[jujutou]

Bonjour à tous,

Voilà je viens vers vous car j'ai un doute et je ne trouve nul part la réponse, elle est surement un peu "bête" mais ça me bloque pour interpréter les résultats d'un TP.

Lorsqu'on utilise un anticorps Erk Total (en western blot et autre), il s'agit de seulement Erk normal ou de Erk normal + Erk phosphorylé ? (de façon général lorsqu'on utilise un anticorps Total on voit quoi? toutes les formes de la cible?)

Car on observe deux bandes, donc j'aurais tendance a dire que ce sont les deux mais du coup des résultats deviennent "bizarre"

Enfin voilà, si vous pouvez m'aider!

Merci à vous et bon week-end !
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[Flyingbike]

Erk total reconnaît comme son nom l'indique Erk et P-Erk
Pour vos deux bandes, il ne s'agit pas de P-Erk et Erk (la phosphorylation n'est pas visible en WB) mais de Erk 1 et Erk2 (44 et 42 kDa)

[jujutou]

D'accord je vous remercie !
A voilà l'explication, j'avais du mal a comprendre (ça n'allait pas dans le sens de se qu'on attendait) Mais si la phosphorylation n'est pas visible en Western blot ça explique tout !!

En revanche, lors d'immunocytochimie avec Erk total en observant les cellules aux microscopes, on aura un marquage à la fois sur Erk et Erk-p c'est bien ça !?

Merci à vous!

[Flyingbike]

en IHC comme en WB, un anti Erk reconnait Erk, qu'il soit phosphorylé ou non !


(Précision en WB on ne voit pas une phosphorylation ponctuelle, (sauf avec un Ac spécifique) mais on peut éventuellement voir un shift sur les protéines très phosphorylées)

[A voir en vidéo sur Futura]

[jujutou]

D'accord

J’aurais une autre question, car on obtient des résultats assez étonnant ...

Normalement lorsque les cellules sont sans sérum, Erk n'est pas phosphorylé et n'entre pas dans le noyau.

Or sur notre image, on observe que la "couleur rouge" de l'anticorps anti-Erk phosphorylé est présent dans le cytoplasme et pas dans le noyau... Comment est-ce possible, si Erk est phosphorylé, il est censé allez dans le noyau ...

Est-ce pareil, l'anticorps Erk-P pourrais fixer sur Erk non phosphoryler ? Si non comment expliquer cela ?


Merci