Calcul de Rf

[invitef3968de5]

Bonjour !

J'ai fait plusieurs chromatographies et je veux maintenant réaliser les Rf.

Le problème, c'est que je ne sais pas quel "tache" prendre le long du parcours de la substance, vu qu'il y en a 5 voire 6.

En fait je compare plusieurs plaques, mais les substances, bien que parfois différentes, finissent toutes à la même hauteur.

De plus, il m'est arrivé d'attendre 30 ou 40 secondes après avoir sorti les plaques des cuves avant de noter le front du solvant. Du coup, celui-ci n'est pas toujours très précis. Comment faire les Rf de manières précises ?
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[invite665a0d0b]

Bonjour spouk
Si le solvant et les plaques ne changent pas, des comparaisons sont envisageables.
Penser à regarder les palques à 254 nm et 360 nm, quelquefois des infos complémentaires peuvent être récupérées (front de solvant encore visible)
Eventuellement une exposition aux vapeurs d'iode ou une pulvérisation du révélateur peut de nouveau faire apparaître certains indices (une tâche avec le front de solvant p.e.)
En cas de substance "multitache" il faut préciser celles qui sont les plus importantes avec les Rf, on peut indiquer aussi la présence de taches secondaires en les localisant relativemnt à la tache principale.
Pour l'avoir pratiqué dans des essais de monographies de pharmacopées, le dépôt de dilutions de la substance à analyser peut permettre d'estimer l'importance des taches secondaires si celà est nécessaire ( vérifier la "linéarité" avec une petite gamme)
Enfin quand on à affaire à un solvant volatil une marque au crayon à l'envers de la plaque avant la migration peut constituer un repère pour estimer le moment ou l'on doit sortir sa plaque, dans ce cas le hauteur correspondant au front de solvant est plus précise.
Cordialement
rls

[invitef3968de5]

Tout d'abord, un grand merci pour avoir pris le temps de répondre à mes interrogations. J'ai finalement réussi à me débrouiller.

Je voulais encore avoir votre avis sur un point :
J'ai réalisé 5 chromatographies contenant chacune 3 spots de limonène (2 de référence, qui sont toujours les mêmes substances et qui sont pures, et 1 de mes 5 extractions). En comparant leur Rf qui sont très proches, j'ai remarqué qu'effectivement, tous les spots contenaient la même substance. Il n'y a aucune valeur de Rf qui sort du lot, néanmoins, certains chiffres diffèrent sensiblement. A quoi sont dûs ces variations ? J'ai déjà quelques réponses :

- J'ai gardé le solvant (constitué d'acétone et de cyclohexane) pendant quelques jours, ce qui fait que le résultat ma dernière expérience, faite le dernier jour, a pu changer. L'acétone est plus volatile que le cyclohexane, le solvant sera composé de plus de cyclohexane à la fin.

- Ma précision (à marquer le centre de la tache, à mesurer les distances, ...) n'a peut-être pas été égale pour chaque plaque, même si j'ai fait attention à ce point.

Qu'en pensez-vous ?

[invite83d165df]

A priori rien d'autre.

En pratique, tu auras la meilleure précision si ton mélange de solvant te permet d'avoir un Rf de 1/3 environ.

Si tu as vraiment besoin de grande précision, il existe dans le commerce des appareils qui déposent très précisément une fine bande de produit à la place d'une tache.

pour moins cher, il existe dans les commerce des plaques CCM avec "zone de préconcentration". Cette zone est composée de kieselguhr, qui ne retient quasiment aucun composé. Du coup, le front de solvant entraîne l'ensemble du dépot à une hauteur fixée avant que la séparation ne commence. On gagne en précision

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitef3968de5]

C'est intéressant d'avoir des détails concernant les moyens d'être plus précis, mais comme mon travail au laboratoire est terminé, je ne vais pas pouvoir les appliquer. J'ai les résultats, je recherche à présent les causes de ces variations.

Encore merci pour tes conseils !

[invite665a0d0b]

Bonjour Spouk
Il ne faut pas attendre de grande précision dans la détermination d'un Rf. Par contre il semble que tu constates une grande variabilité. A toi de résumer les résultats de tes observations et de tenter une explication, la piste de l'instabilité du solvant me semble intéressante.
Dans tes conclusions tu peux proposer des solutions au problème et je crois que la littérature doit être abondante sur le sujet.
A consulter en tous cas, la bible de la CCM K. Randerath : Chromatographie en couche mince; Gauthier-Villars (1964)
Cordialement
rls