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HPLC pic dans le volume mort



  1. #1
    floflo45

    HPLC pic dans le volume mort


    ------

    Bonjour,
    Je travaille sur des principes actifs de médicaments.
    L'analyse d'un lot en HPLC -phase inverse, colonne C18 classique- fait apparaitre un pic au niveau du volume mort. Il sort même plus exactement avant le pic du système.
    Quels sont les composés susceptibles de sortir a cet endroit (mis à part un sel) ?

    Merci

    -----

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  3. #2
    ali benayahoum

    Red face Re : HPLC pic dans le volume mort

    Bonjour,
    Je travaille sur une HPLC avec une colonne C18;j'utilise ACN/eau acidifier comme solvant,mon problème est le dédoublement des pics mlgrés que mon composés est pur.
    Merci

  4. #3
    guillaume05788

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Bonjour

    Floflo, aucun pic ne peut sortir avant le volume mort puisque par définition, le volume mort correspond à un composé qui n'est pas du tout retenu, dans ce cas, utilise une colonne HILIC. Si le pic sort véritablement avant le volume mort, il ne provient pas de ton échantillon mais peut-être d'une espèce qui serait relarguée par l'injecteur lors du process d'injection et envoyée sur la colonne avant ton échantillon.

    Ali, quelle est ta molécule? Peut-être que ta substance est constituée d'isomères séparables de ta molécule?

  5. #4
    chicochem

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Il m'est arrivé qu'un produit de l'injection précédente passe sur l'analyse en cours. Vérifie en passant un blanc avanc et après.

  6. #5
    ali benayahoum

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Bonjour,
    Au niveau du CCM je vois une seul tache;donc il n'y a pas de dégradation;;;;;;

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    HarleyApril

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    bonsoir
    L'HPLC étant plus performante que la CCM, une seule tache ne signifie pas qu'on n'aura qu'un seul pic
    Tu as peut-être affaire à un mélange de deux produits de structures voisines comme deux isomères par exemple (guillaume ne parlait pas de dégradation) ou bien ton produit comporte une partie salifiable et tu n'es pas assez loin du pKa
    Cordialement

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  10. #7
    ali benayahoum

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Bon soir,
    J'ai injecté un melange,tout les pics montrent un dédoublement!!!!!!

  11. #8
    jgiovan

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Salut,

    Pics dédoublés = colonne flinguée (en général).
    Je te conseille de changer de colonne.

    Pour les substances acides ou basiques, les pics peuvent se dédoubler si l'éluant n'est pas tamponné. Personnellement je travaille toujours avec une phase aqueuse acide (acide phosphorique).

    Je conseille également de préparer les échantillons dans un mélange proche de la composition de l'éluant (au début du gradient). Quand les composés éluent très tôt, ca évite également le dédoublement des pics.

  12. #9
    ali benayahoum

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Salut,
    MA molécule est le trihydroxy 3,5, 4' stilbène, il existe sous deux formes cis et trans, mais normalement il était cristalisé avant injection en HPLC. et la forme cis même si elle existe devrait sortir à un temps de rétention différent et avec un maximum d'absorption different de la forme trans.

  13. #10
    guillaume05788

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Ali,

    J'ai déjà travaillé sur le resvératrol.

    Je te conseille de lire la publi suivante

    Rapid method for resveratrol determination by HPLC with electrochemical and UV detections in wines
    Food Chemistry, Volume 87, Issue 1, August 2004, Pages 151-158
    Irena Kolouchová-Hanzlíková, Karel Melzoch, Vladimír Filip, Jan Smidrkal

    Tu y remarqueras que les spectres uv des deux molécules ne sont pas si différents. Les deux isomères cis et trans se séparent bien en HPLC (peut-être beaucoup trop pour que ça donne un dédoublement de pic mais ça dépend avant tout de ton gradient). Attention aussi, le composé standard pur d'un isomère s'isomérise très facilement à la lumière pour donner un mélange des deux substances.

    Je te conseille de faire une RMN pour vérifier la pureté de ton produit. Tu dois avoir une constante de couplage de 16Hz pour le trans pour les deux protons de ta liaison stilbénique avec un déplacement chimique vers 7 ppm. Évidement, tu ne dois pas avoir d'autre signal avec une constante de couplage plus petite sinon, c'est que tu as du cis.

    Bonne chance

  14. #11
    marseillfrance

    Unhappy Hplc

    slt tou le monde
    en realité jé besoin de votre aide tous
    je narive pa a distingué entre tou lé type de chromatographie
    qell é la relation solvan-colonne-soluté
    le choix du solvan

    i need y help

    voila mon mail pour : #####pas de mail#####

    dont forget me
    Dernière modification par HarleyApril ; 27/03/2009 à 21h46. Motif: adresse mail

  15. #12
    guillaume05788

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Bonjour,

    Pas d'adresses email stp dans le forum.

    Pour la chromatographie, j'ai l'impression que tu demandes à tout savoir alors que tu ignores tout.

    Je te conseille de chercher des cours de chromatographie sur le net (Il y en a beaucoup - tous à peu près bon)

    Sinon pose une question plus précise stp.

    Merci

  16. Publicité
  17. #13
    HarleyApril

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    bonsoir
    merci de te conformer à la charte :
    pas d'adresse mail dans les posts
    pas d'écriture en sms

    pour la modération

  18. #14
    marseillfrance

    Angry Hplc

    slt

    en realité jai laissé mon adress mail c'est just pour menvoyer des document pour maider parcque vraiment je sui dan lambara .....

    aidez moi

  19. #15
    marseillfrance

    Angry Hplc

    SVP arretez de me critiquer ...... envoyer moi des reponses en urgence

  20. #16
    guillaume05788

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Citation Envoyé par guillaume05788 Voir le message
    Je te conseille de chercher des cours de chromatographie sur le net (Il y en a beaucoup - tous à peu près bon)

    Sinon pose une question plus précise stp.

    Merci
    Cordialement

  21. #17
    alibo

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    Bonjour,
    Je suit entrain de doser la caféine, tout est bon concernant la surface S, hauteur H,le problème est le TRAITEMENT INFORMATIQUE DES DONNÉES.

    Salutation.

  22. #18
    marseillfrance

    Question Re : HPLC

    je dose la betamethasone goutte par HPLC
    solution étalon: dissoudre 50mg de betamethasone avec une solution à 1 pour mille acide acetique glacial danns methanol et completer au volume 50ml
    faire une dilution dans le meme solvant dans une fiole de 50ml

    j'ai rien obtenu comme resultat et je n'arrive pas à interpreter
    c'est quoi le probleme ??

    sachant: detecteur UV
    injecteur rhéodine

  23. Publicité
  24. #19
    sabulle

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    c'est pocible ke c'est du à une injection précédente ou au faite que tu ais mal conditionné ta colonne prolonge ton run time si c'est une séquence ou bien conditionne ta colonne plus longtemps si c une seul injection. le pic ke ta est du à une absoption avant que tn echantillon pass dans la colonne ....voilà j'éspère que ta compris un peu bon courage

  25. #20
    sabulle

    Re : HPLC pic dans le volume mort

    c'est flou comme probléme ..Soit plus précis

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