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TP Biochimie - cinétique enzymatique



  1. #1
    lauren-gbx

    TP Biochimie - cinétique enzymatique

    Bonsoir,

    J'ai un gros problème avec un rapport de biochimie, je ne vois pas la démarche à suivre et la théorie ne m'aide pas vraiment!


    On doit mesurer l'influence de la température sur la vitesse de réaction de la phosphatase alcaline.
    Pour chaque température (0,20,37 et 50°C) , on a utilisé
    - 5 tubes contenant 0,2 ml d'enzyme, mais avec des temps de réaction différents (40,30,20 et 10 min)
    -1 tube témoin sans enzyme, t=30 min
    On a placé dans tous les tubes 0,3 ml de pnPP (qui s'hydrolyse en ion pnPP coloré). On a arrêté les réactions avec du NaOH et on a mesuré l'absorbance des tubes.


    La question est : tracer le graphe de la vitesse de réaction en fonction du temps.
    J'aimerai savoir (le prof refusant de nous donner toute info ^^)
    - si cette vitesse de réaction correspond à la vitesse de disparition du pnPP (et donc de formation de l'ion pnPP) ?
    - Comment calculer la quantité finale de pnPP restant ou d'ion pnPP formé en ne connaissant que l'absorbance?...je dois utiliser Beer-Lambert?
    - Est-ce que je dois faire une moyenne de vitesse sur les 5 tubes à enzymes, puis faire le graphe, faire un 2e graphe avec les témoins et soustraire les deux?

    Merci pour vos pistes

    -----


  2. #2
    moco

    Re : TP Biochimie - cinétique enzymatique

    La vitesse de réaction est, par définition, la vitesse de disparition du produit initial.

    Pour résoudre ton problème, tu mesures l'absorbance A en fonction du temps. Tu n'as pas besoin de connaître le coefficient epsilon.
    J'imagine que ton produit initial est coloré, et que le produit final est incolore. Dans ce cas, tu cherches le temps au bout duquel l'absorbance A est devenue égale à la moitié de l'absorbance intiale. Ce temps t' te donne le temps de demi-vie. La constante de vitesse vaut : k = ln2/t' ; où ln2 vaut 0.69.

  3. #3
    raymond_la_science

    Re : TP Biochimie - cinétique enzymatique

    Bonjour
    En complément de ce qui t'a été indiqué, la vitesse de la réaction est la vitesse à laquelle se forme le produite de la réaction (l'ion paranitrophényle coloré)
    Il faut tracer les courbes Absorbance (Ion paranitrophényle formé ) - Absorbance ( tube sans enzyme) f(t) pour chaque température.
    Les courbes sont proportionnelles à la courbe [P] f(t) et leur pente permet de suivre l'évolution de la vitesse v à une température donnée, pour une concentration en enzyme et une concentration initiale de substrat constantes.
    A toi d'interpréter ce que tu observes.

    Peut-être observeras-tu des conditions optimales et une transformation totale du substrat (le phospate de paranitrophényle ) dans ces conditions si tu connais la concentration en substrat dans la solution initiale, il est possible d'exprimer les vitesses en unité de masse / unité de volume et unité de temps. Sinon les vitesses peuvent être notées en % de la vitesse maximale observée au cours du T.P.
    Bon courage
    rls

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