Salut à tous.
Dans le cadre de mes travaux, j'utilise la méthode de Bernfeld pour le dosage des sucres réducteurs (coloration par l'acide dinitrosalicylique) obtenus après action d'une glycosylase donnée sur son substrat. A l'issu de l'incubation, le mélange enzyme+substrat est placé dans un bain-marie à 100°C pendant 5 minutes afin de stopper la réaction enzymatique et induire la coloration des sucres réducteurs. Réalisant un petit test, j'ai constaté une évolution logarithmique de l'intensité de la coloration avec le temps d'ébullition (temps testés : 3 - 5 - 10 - 15 minutes). Ainsi, une augmentation du temps d'ébullition permettrait d'accroître la réponse enzymatique (et a priori la sensibilité du test) et, ce faisant, de réduire la quantité d'extrait enzymatique utilisée au départ de l'incubation (disposant de faibles quantités d'extraits enzymatiques, vous comprendrez mon intérêt pour ce résultat). Or, dans la littérature, le temps d'ébullition cité est invariablement de 5 minutes lorsque les auteurs utilisent la méthode de Bernfeld (ou une méthode dérivée). Puis-je malgré tout augmenter le temps d'ébullition afin d'accroître la réponse enzymatique obtenue ?
Merci d'avance pour votre aide.
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