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influence du pH sur HPLC



  1. #1
    JoJoCerise

    influence du pH sur HPLC


    ------

    Hello tout le monde!!!!
    encore un problème avec mon sujet de stage
    je rememore le truc: je suis en phase inverse colonne C 18 et phase mobile ( acetonitrile/methanol/tampon)
    Je veux separer mon etalon internet de ma molécule ( secobarbital et thiopental respectivement) pouvez vous me dire si il y aurait un changement si je modifie le pH de mon tampon? et dans quel sens?
    il est deja a 3.8.
    Merci beaucoup beaucoup beaucoup
    PS: j'ai cherché et il me semble ne pas avoir trouvé de sujet similaire dans le forum

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    HarleyApril
    Modérateur

    Re : influence du pH sur HPLC

    bonjour
    je suppose qu'il s'agit d'étalon interne ...
    si la modification du pH entraine une variation de la charge du produit, alors il y aura changement du temps de rétention
    en phase inverse, un produit ionisé est peu retenu alors qu'un produit non ionisé l'est

    cordialement

  4. #3
    Pipo de Lyon

    Re : influence du pH sur HPLC

    Bonsoir,
    si tu le peux (et je pense que cela est faisable vu tes composés) récupère les caractéristiques de log P et log D de tes composés. Cela te permettra de savoir si tu peux jouer sur le pH de ta phase mobile afin d'induire une différence de rétention. Sinon tu peux jouer sur le type de colonne que tu utilises et le débit (est-t-il optimal pour ta colonne???).
    Après, il faut savoir que suivant le mode de détection que tu utilises, la séparation ligne de base n'est pas forcément obligatoire voir même conseillée (spectrométrie de masse par exemple...)
    Cordialement,

  5. #4
    JoJoCerise

    Re : influence du pH sur HPLC

    mon débit n'est pas optimal je suis a 1mL/min. Mais bon mon run est de 26minutes et comme ce sont des resultats qui sont assez urgent à donner, ils ne veulent pas perdre plus de temps même si ça separerait plus les pics.
    En ce qui concerne la colonne c'est une C18 et je travaille avec un detecteur Uv/Visible et un detecteur à barrette de diode.
    Merci pour le log P et log D je vais me renseigner.

  6. A voir en vidéo sur Futura

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