Bonjour,

Je suis un étudiant en stage dans un laboratoire de chimie analytique. Le thème de mon stage est une comparaison des performances d'une HPLC/MS/MS et d'une UPLC /MS/MS.

On m'a donné une méthode validée sur l'HPLC et je dois l'adapter sur l'UPLC avant de penser valider la méthode.
Il s'agit de quantifier des estrogènes dans l'eau.

Les colonnes utilisées sont des ACQUITY UPLC BEH C18 (soit de 100 ou 50 mm-2.1mm-1.7micrometre)
La méthode initiale propose un gradient d'élution avec de l'eau contenant 0.1% d'hydroxyde d'ammonium et du méthanol contenant 0.1% d'hydroxyde d'ammonium.


j'ai essayé de faire varier différents paramètres comme le temps de run, le débit, le Dwell, la longueur de ma colonne, le volume d'injection: rien n'y fait j'obtiens une réponse beaucoup beaucoup moins sensible et un déplacement de pics avec l'UPLC.

Ces travaux préliminaires à mon expérience de validation, sont réalisés avec un standard (point haut de ma gamme) et un blanc.

Mes échantillons sont passés sur l'HPLC et donnent de bons résultats ce qui prouve une préparation correcte.

Le détecteur est utilisé avec l'HPLC et donne de bons résultats.

1- j'aimerais que l'on me confirme le rôle de l'hydroxyde d'ammonium dans ma phase mobile

2-Je suspecte un problème de colonnes mais je ne sais pas le justifier scientifiquement. Pourriez-vous m'aider?
Ces colonnes ont été utilisées dans le passé pour l'analyses de boues de sédimentation pas trés propres.
Je dois préciser que je ne constate pas d'augmentation de pression du système.

3- A quoi pourrait être dû cette perte de sensibilité et ce déplacement de pics?

Si vous pouviez-vous me sortir de cet épais brouillard, je vous en serais fortement reconnaissant.

Mille merci par avance