Choix HPLC

[invite473579de]

Bonjour, je suis étudiante en master, j'effectue actuellement mon projet de fin d'étude et j'ai un problème au niveau de mon sujet:
je travaille sur la validation d'un médicament par HPLC wj'ai beau effectué des essais changer des colonnes j'obtient toujours une mauvaise résolution entre le principe actif qui est l'acide ascorbique et le placebo, sachant que ce médicament contien deux principes actifs: l'acide acétylsalicylique et l'acide ascorbique: j'ai utilisé des colonnes C18 phase inverse spécifique pour l'acide acétylsalicylique, d'autre pour l'acide ascoribique, Nucléosil, SUNFIRE, NH2... j'obtient aucun résultats, si vous etes familier avec ce genre d'etude veuillez m'aider SVP.
Merci d'avance
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[inviteb0fd854f]

Bonjour,

Pour améliorer ta résolution, tu peux jouer sur d'autres paramètres : caractéristiques de ta colonne (longueur et diamètre des particules) , sur la température, la phase mobile (pH, composition)...

[invite473579de]

Merci d'avoir pris le temps de me répondre, j'ai oublié de mentionner que j'ai aussi changer la phase mobile wjouer sur les proportions et tout comme vous dites, pour la colonnes toutes les colones que j'ai utilisé sont longue donc un paramètre d'avantage pour moi.
Si vous avez d'autres suggestions je suis à l'écoute
J'attend vos réponses
Merci

[inviteb0fd854f]

Oui, à diamètre de particule identique, plus ta colonne sera longue, meilleure sera ta séparation (puisque tu augmentes ton nombre de plateaux).
Sinon, tu peux injecter une plus petite quantité d'analyte, tu auras des pics moins larges donc mieux séparés mais ils seront également plus petits donc tu auras des LQ/LD plus hautes.
Est ce que tu peux nous en dire plus sur ta méthode ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite23745254]

bonsoir,

La Pharmacopée Européenne fait souvent des tests de résolution pour tester le système, je pense que ces 2 produits y sont inscrits, si tu as de la chance peut être que le produit qui sert au test ressemble au tien et cela peut t'aiguiller sur le système HPLC à utiliser.
Une colonne diamètre 3mm donne des pics plus fin mais va falloir passer sur longueur 150 et attention à la pression
Peut être que tu peux augmenter la fréquence d'acquisition des points et donc s'il y a plus d'acquisition peut être...
Moi je m'orienterais vers une colonne dont la spécificité est la séparation stérique.

[invite473579de]

Bonjour,
Effectivement j'ai chercher dans la pharmacopée européenne et c'est par elle que je me guide dans mes expériences, j'ai appliquées les conditions de l'acide acétylsalicylique et aussi les conditions de l'acide ascorbique seul, mais il y a rien bien sur qui rassemble les deux, donc c'est ce qui pose le problème, et dans ce cas c'est l'acide ascorbique qui me pose le problème avec le placebo et plus spécifiquement avec l'acide citrique dans le placebo parce que j'ai injecter tous les excipients pour savoir exactement lequel coïncide avec l'acide ascorbique.
Merci de votre réponse

[invite23745254]

bonsoir,
Est ce que j'ai bien compris?? entre l'acide ascorbique et l'acide acétylsalicylique tu n'as pas de problème? ton pb de résolution est entre l'acide ascorbique et l'acide citrique c'est ça??Mais tu as quoi comme détecteur?

[invite473579de]

Oui vous avez bien compris, le problème c'est entre l'acide ascorbique et le placebo, j'ai injecté tous les excipients du médicament et il s'ets avéré que c'est l'acide citrique et le sodium cyclamate qui pose le problème de résolution.
J'ai un détecteur à barrette diodes.

[invite23745254]

Bonsoir,

Je suppose que la réponse UV des 2 excipients ne doit pas être terrible .
Est ce qu'en faisant l'acquisition à 2 longueurs d'ondes différentes il n'y a pas moyen d'avoir l'un puis l'autre ?

[invite473579de]

salut, et bien j'ai changer de détecteur mnt j'utilise l'UV wj'ai changer aussi de colonne j'ai utulisé une à 3µm et ca na rien donné.
dsl de vous casser la tete avec ce problème .

[inviteb0fd854f]

Est ce que tu pourrais nous montrer tes chromatos ou faire un tableau récapitulatif de tes essais et la résolution entre les deux composés. ça aiderait à y voir clair.

[invite473579de]

Dsl, je peux pas donner les informations en détailles parce que c'est un projet dans la société dans laquelle j'effectue mon stage, mais poser moi vos questions j'y répondrai.

[inviteb0fd854f]

Quels essais as tu déjà fait et comment ta résolution à variée ?

[invite23745254]

bonsoir,

une colonne 3µm donc tu as pris une colonne avec un diamètre plus faible aussi non ? Le diamètre est lui aussi important.La longueur ne joue pas énormément dans la vraie vie!! (les plateaux théoriques oui oui mais non )
Qu'as tu changé à ton détecteur ? tu as dit que tu avais un barette donc t'étais uv non ? je ne vois pas bien comment tes produits peuvent absorber en uv même à 200 ou 220 nm? tu dois avoir des pics parasites de solvants et le moindre poupouillième d'impureté va absorber et tout parasiter.
Parfois le THF affine les pics si tu peux quelques % dans ta phase mobile, pareil avec 1% de TFA dans l'eau.
Si tu as un gradient as tu essayé de le travailler dans cette zone?
Si tu as une U-HPLC sous le coude je crois qu'elle serait la bienvenue mais la détection uv me semble compliquée
Voilà voilà!!
Bon courage