Bonjour à tous.
J'aurai voulu un peu d'aide pour un TP de biochimie sur la cinétique enzymatique.
Le but de ce TP est d'étudier la vitesse d'hydrolyse de l'ONPG par la β-galactosidase en fonction de la concentration d’ONPG et de la température. On a donc mesurer les vitesses en fonction des concentrations et nous avons tout regroupé dans des tableaux. (25, 30, 35 et 40 °C) pour des concentrations de ONPG de (0.2 / 0.4 / 0.6 / 0.8 / 1.0 / 1.5 / 2.0 / 3.0 mM) pour chaque température.

Voila l'énoncé :

1. Détermination des paramètres cinétiques Vm et Km à 25°C.
- Regrouper dans un tableau les conditions expérimentales et la vitesse initiale d'hydrolyse obtenue pour l'expérience N°2.
- Représentation graphique Vi = f (ONPG).
Equation de Michaelis puis représenter les trois linéarisations possibles. Présenter dans un tableau les valeurs de Km et Vm obtenus sans oublier les unités. Evaluer les incertitudes sur ces valeurs. Commentaires.

J'ai regroupé les vitesses d'hydrolyses dans un tableau et tracé les graphiques Vi = f (ONPG).
Grâce à cette courbe, j'ai déterminé graphiquement Km. Le problème, c'est que je n'arrive pas à calculer Km. Je connais la formule : Vi = ([S].Vm) / ([S] + km) d'où j'en ai dédui Km = (([S].Vm)/Vi) - [S].

Le problème, c'est que je ne sais pas à quoi correspondent ces symboles. J'ai supposé que Vm était la plus grande vitesse d'hydrolyse que nous avons mesuré ( pour chaque température) et que [S] était la concentration en ONPG, mais quelle concentration ? Nous avons une concentration différente de ONPG dans chaque tube... (la concentration qui correspond à Vm ou la concentration de la solution mère ?). Et concernant Vi, je ne sais pas du tout à quoi cela correspond. Pareil pour les unités.

Par exemple, à 25°C, nous avons trouvé :

[ONPG] en mM // Activité enzymatique en Abs/s
0.2 => 245
0.4 => 440
0.6 => 622
0.8 => 846
1.0 => 951
1.5 => 1103
2.0 => 1362
3.0 => 1507

graphiquement, j'ai déterminé Km = 0.645. Mais j'ai besoin de calculer Km, pour être plus sure de cette valeur.
Pour les 3 linéarisations, je pense pour m'en sortir si je comprend à quoi correspond Vi.
Comment évalue t-on les incertitudes ?
Pour le commentaire, je suppose que je vais trouver des résultats différents en fonction de la température, peut-on dire qu'une enzyme ne peut "travailler" qu'a une certaine température, qu'au delà elle serait moins ou plus efficace ?

Voila, j'ai juste besoin d'un peu aide. je dois rendre ce TP assez vite alors il faudrait que je le termine ce weekend. Merci beaucoup d'avance.