Analyse de la vitamine A

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Bonsoir,

L'analyse se fera par HPLC sur un échantillon de beurre, le principe consiste en une hydrolyse à chaud d’une prise d’essai par une solution d’hydroxyde de potassium en milieu éthanolique, extraction par un solvant approprié et dosage du rétinol par chromatographie liquide haute performance sur colonne de gel de silice

Je n'ai pas compris la méthode d'extraction qui est la suivante : Dans une ampoule à décanter, prélever 100 cm3 d’hydrolysat + 80 cm3 d’eau et 100 cm3 d’éther de pétrole
- Agiter pendant 1 à 2 minutes et laisser décanter
- Soutirer la phase hydro-éthanolique dans une seconde ampoule à décanter et procéder ensuite à deux extractions de cette phase aqueuse en récupérant les phases éthérées dans la première ampoule à décanter
- Laver la phase éthérée avec des fractions de 100 cm3 jusqu’à la neutralité, vérifiée à la phénolphtaléine
- Éliminer les traces d’eau par filtration sur du sulfate de sodium
- Évaporer à sec à l’aide de l’évaporateur rotatif.

Pourquoi a t-on fait 2 extractions de la phase aqueuse alors que la vitamine A est censée être liposoluble ?
Pourquoi laver la phase éthérée jusqu'à neutralité?

Merci de votre aide
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[moco]

On procède à plusieurs extractions en série, quand le produit cherché n'est pas totalement extrait par une première extraction. Si la première extraction extrait 80% du produit cherché, la deuxième extraira les 80% du 20% résiduel, donc l'ensemble des deux extractions extraira 96% du total.