Bonsoir à tous !
Voilà, en HPLC/MS/MS, je sépare des composés organiques nitrés et nitroaromatiques (groupements NO2, ONO2 en majorité).
J'utilise une colonne avec un greffon phényle.
Mes deux solvants sont :
A: Tampon formiate ammonium 0.5mM à pH + acide formique
B : MeOH
Mon gradient est :
0 : 25% A et 75% de B
3 min : 25% A et 75% de B
15 min : 100%B
20 min : 100%B
25 min : 25% A et 75% de B
45 min : 25% A et 75% de B
Mes composés sont séparés de 4 à 18 minutes.
Mon problème est que je me suis aperçu que mes temps de rétention était variable, rarement fixe...
Pour un composé par exemple, je peux avoir un Tr soit de 17.2, soit de 17.88 minutes....ce qui est énorme..
Par contre, quand je lance une série de 10 injections, mes Tr varient au maximum de 0.5%....
Donc on se pose plusieurs problèmes :
- Variation de la température : on a thermostaté la colonne, rien n'y fait...
- Concentration du tampon trop faible ? (en effet, mon pH varie jusqu'à 5 en ajoutant du MeOH)
- Présence de bulles d'air ? (à vérifier)
J'ai noté que je n'avais pas une pression stable au début de mon gradient, soit ça veut dire que j'ai de l'air, soit je ne sais pas ^^
Que pensez-vous de mon gradient ?
Avez-vous déjà ce genre de problèmes ?
Merci à vous !
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