Salut!
J'ai un certain probleme avec la spectrometrie jespere que vous pouvez m'aidez.
On connait tous la courbe fameuse de l'absorbance de NAD et NADH en fonction de la longuer d'onde, alors on connaissant la longuer d'onde qu'on utilise on va directment savoir l'absorbance n'est ce pas?
Mais en appliquant la loi de beer lamber on voit que l'absorbance depend de C et L, alors ça varie et la longuer d'onde nest pas suffisante pour le savoir.
Pouvez vous me clarifier celui ci svp?
Bonjour,
En spectrométrie d'absorption, la longueur d'onde n'est pas reliée à l'absorbance. Et cela n'a rien à voir avec le NAD ou n'importe quelle autre substance. L'absorbance est proportionnelle à la concentration, mais elle n'est pas proportionnelle ni inversement proportionnelle à la longueur d'onde. Il n'y a tout simplement pas de relation mathématique entre la longueur d'onde et l'absorbance. Rien ni personne ne peut prévoir l'absorbance à une longueur d'onde en fonction de l'absorbance à une autre longueur d'onde.
Par exemple, une solution de sulfate de cuivre CuSO4 0.1 molaire a une absorbance de 1.2 à la longueur d'onde de 700 nm. Elle sera de 1.1 à 700 nm et 800 nm. Mais elle sera égale à zéro à 400 et 500 nm. Et ceci personne ne peut le prévoir. C'est expérimental.
Si tu changes la concentration, l'absorbance change. Mais elle change toujours de la même façon. Avec une solution de CuSO4 2 fois plus concentrée, donc 0.2 molaire, l'absorbance sera le double, donc de 2.4 à 700 nm, et de 2.2 à 700 et 800 nm, et bien sûr de zéro à 400 et 500 nm.
Si tu prends toujours la même cuvette de mesure de 1 cm d'épaisseur, le rapport absorbance/concentration restera constant à une longueur d'onde donnée. Il vaut 12 L/mol pour le sulfate de cuivre à 750 nm, 11 l/mol à 700 et 800 nm, et zéro à 400 et 500 nm.
Merci beaucoup pour votre temps, c'est clair maintenant . Mais comment on explique cette courbe? :
https://fr.wikipedia.org/wiki/Spectr...le:NADNADH.svg
Bonjour,
On n'explique pas un spectre d'absorption optique. C'est comme le cours d'une rivière sur la carte. On ne l'explique pas. On le constate.
Mercii beaucoup Monsieur ça m'vraiment aidé!!
Si, on peut expliquer l'allure d'un spectre UV. Qualitativement, en tenant compte des groupements de la molécule. Plus finement avec les règles de Woodward et Fieser. Plus précisément encore en calculant les niveaux énergétiques des orbitales moléculaires.Envoyé par moco
Cordialement
Bonsoir,
J'aimerais bien voir les calculs dont parle Harley April.
Il 'suffit' de calculer les niveaux énergétiques des orbitales moléculaires. Les logiciels de modélisation moléculaire le font très bien.
Ensuite, la différence énergétique entre le dernier niveau occupé et le premier niveau non occupé permet de trouver la longueur d'onde correspondante.
Il faut bien entendu vérifier que les règles de sélection permettent la transition.
Ça, c'est pour les longueurs d'ondes du spectre, mais je pense que tu maitrises le sujet https://forums.futura-sciences.com/c...ml#post6284915
On peut même calculer les valeurs des coefficients d'extinction. Je t'avais mis un lien vers une thèse précédemment. Les calculs y étaient détaillés.
Cordialement
Dernière modification par HarleyApril ; 30/12/2018 à 12h20.
Bonjour,
Il me semble que les calculs dont parle Harley April donnent des repères, comme les maximum d'absorption. Mais ils ne déterminent pas un spectre. Pour y parvenir il faudrait connaître les sous-niveaux vibrationnels et rotations, et, à ma connaissance, ces sous-niveaux ne se calculent pas. Ils se déterminent à partir du spectre.
Voici un exemple de ce à quoi on peut arriver :
Thèse Brémond
Tout d'abord : Bonne année à Harley April et à tous les autres !
Et ensuite, merci pour la documentation sur la forme d'un spectre visible. C'est étonnant qu'on arrive à reproduire par calcul un tel spectre. C'est même prodigieux. Mais il faut bien reconnaître que, si on arrive à placer correctement les pics d'origine vibrationnelle, et à expliquer leur provenance, on n'explique pas pourquoi telle transition a plus d'importance qu'une autre, donc il me semble qu'on ne peut pas calculer la valeur des coefficients epsilon. donc la forme du spectre.
mais si moco, on calcule aussi les epsilons, cf post 8
