Biochimie : méthodes de séparation / purification

[Choco]

Bonjour
En biochimie j'ai deux questions à traiter, l'une suivant l'autre et je dois l'avouer plus je creuse plus je suis confuse.

Citez:
Méthodes de séparation des mélanges de substances
et
Méthodes de purification de substances chimiques

Je me base sur les définitions suivantes
Séparation : En chimie et physique, un procédé de séparation est une technique ou une technologie permettant de transformer un mélange de substances en deux ou plusieurs composants distincts.

Purification : consistant à éliminer les impuretés afin d'obtenir un produit purifié.

Donc via cela j'ai le classement suivant :
Séparation :

• Décantation
  Filtration (simple / sous vide)
  Extraction par solvant (aqueux ou organique)
  Centrifugation (répartition par granulométrie)

Purification :

• Distillation (factionnée)
  (Re)cristallisation
  

Mais quid de:
Chromatographie, via la migration on obtient plusieurs phases mais aussi des produit pur, même si cela concerne plus de l'analyse.
Et aussi j'en arrive a douter du classement de l'extraction par solvant, on obtient plusieurs phase (séparation) mais on cherche a extraire un composant en particulier.
Je me sens perdue avec ces deux énoncés car les définitions de nombreuses techniques se recoupent ........
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[moco]

La séparation de constituants et la purification sont deux expressions interchangeables. On parle de séparations, quand on veut récupérer les différents constituants d'un mélange. On parle de purification quand on ne cherche à récupérer que l'un des constituants du mélange, celui qui est présent en proportions plus grande que le ou les autres. On peut fort bien utiliser la même technique pour faire une séparation ou une purification. Mais on constate que certaines techniques conviennent mieux pour une purification ou pour une séparation. Mais en principe on pourrait utiliser n'importe quelle technique pour l'une ou pour l'autre de ces opérations. Par exemple, la distillation convient bien à une purification. Elle effectue une moins bonne séparation. L'extraction par solvant convient bien à une simple séparation. Elle est plus laborieuse dans une séparation. Etc.

[Bounoume]

La séparation de constituants et la purification sont deux expressions interchangeables.

il est exact que des méthodes telles que les diverses chromatographies, ou l'électrophorèse simple permettent en usage général de séparer (pour détection/mise en évidence) divers composants d'un mélange, mais aussi, industriellement, d' obtenir spécifiquement, purifié, un des composants d'un mélange.....
l'obtention de UN composé presque pur y est possible même dans un mélange complexe....
pour ça

Décantation
Filtration (simple / sous vide)
Extraction par solvant (aqueux ou organique)
Centrifugation (répartition par granulométrie)

ça permet seulement de séparer 2 phases supposées contenir des classes chimiques différentes......
c'est seulement dans des cas particuliers où le produit brut a pour seules impuretés des composés qui vont tous se retrouver dans la phase 2, et alors ça permettra de le purifier. très grossièrement......

le cas de la distillation fractionnée est particulier: dans le cas du pétrole brut (infâme mélange d'hydrocarbures) ça permet de séparer différentes fractions industriellement utiles, elles-mêmes composées de mélanges en proportions variables de composés élémentaires, mais dans le cas de l'air atmosphérique, par le procédé Claude, ça comporte l' équivalent d'une distillation fractionnée de l'air liquide.... et ça renvoie O2 et N2 'purs' ou du moins à des puretés acceptables....
alors qu'en conclure? c'est encore c'est les 2, mon adjudant......

Mais il y a aussi la purification chimique....... qui ici a pour nom exact "extraction"
je veux extraire et purifier le C02 produit par une fermentation.... pour analyse isotopique ultérieure....
ben je vais l'extraire des gaz produit.. avec NaOH, puis le régénérer depuis les carbonates , avec un excès de H2SO4....
c'est un des (rares) cas ou la purification fait appel à un mécanisme bien spécifique du corps à purifier (à condition que les réactifs soient de pureté reconnue adéquate avec la pureté du produit à obtenir...)

il y a aussi une notion de 'purification' au sens pharmaceutique ou biologique: obtenir une "soupe" qui a les propriétés spécifiques recherchées, par exemple stérilité + absence d'allergènes + absence de toxiques reconnus + présence de l'agent recherché bien sûr.....
on va 'purifier' une culture virale pour avoir l'agent vaccinal (donc par exemple ultrafiltration, traitements chimiques divers....), purifier un enzyme pour l'utiliser comme réactif d'analyses, purifier une protéine, un anticorps, une 'fraction" : , une toxine (botox par exemple) etc... et là je suis incapable de te lister la suite des techniques successivement nécessaires....

[Flyingbike]

Hello

On peut aussi s'amuser à distinguer les purifications/séparations à visée préparatives, ou à visées analytiques, par exemple. Les échelles ne sont pas les mêmes et les techniques à employer, du coup, très différentes

(Ex, je peux purifier une protéine sur gel de polyacrylamide, pour la passer en spectro de masse ou même faire des analyses enzymo. Par contre, pour en préparer des lots de plusieurs mg et au delà, ce n'est clairement pas une technique à envisager)

[A voir en vidéo sur Futura]

[Bounoume]

re.......
même si toi, Flyingbike, tu serais mieux à même d'en parler ici, il y a aussi des méthodes spécifiques de purification, en biologie et chimie biologique....
par exemple devant un mélange de composition définie (mélange d'anticorps par exemple) on va saturer le mélange avec tous les antigènes-cible des anticorps indésirables....
les complexes formés vont être séparés du mélange, et finalement on obtient uniquement le composé qui n'a réagi avec rien d'autre......

et, hors champ de la simple biochimie.... en microbiologie , la séparation et l'obtention d" souches en culture pure, sur la gélose d'une boîte de Petri, en la striant avec une pointe trempée dans le mélange à élucider.
quand tout va bien, chaque bactérie de la quasi élution va se développer en culture pure....
pour choco, description de la méthode: http://fr.huidalab.com/news/petri-di...ration-method/..... très vieux souvenirs.....
c'est une méthode de séparation très efficace (obtenir la liste des germes de la soupe par identification ultérieure de chaque souche extraite) et de purification parfaite (d'emblée on obtient LA souche pure....)


cordialement