Bonsoir,
J'ai une question en ce qui concerne le clonage avec un plasmide, j'ai cru comprendre quelques trucs mais j'ai peur de m'embrouiller avec la PCR en ce qui concerne les enzymes de restriction.
Voilà ce que je crois comprendre :
En premier il faut séquencer le génome pour obtenir les différents fragments d'un gène dont un codant pour la protéine qui nous intéresse et on veut cloner ce gène.
on met les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène ?
Ensuite on met ces plasmides dans des bactéries dans un milieu avec de l'ampicilline pour voir lesquelles résistent et donc lesquelles portent la protéine qui nous intéresse.
je crois que je confonds les sites de restriction présent sur le plasmide et les enzymes de restriction que l'on ajoute aux amorces pour faire la PCR.
j'ai un exercice ou il faut donner le protocole de clonage mais c'est tellement flou pour moi que j'ai du mal à y répondre.
Le problème c'est que je comprends comment "faire" les amorces mais je ne comprends pas trop à quoi elles servent
Je vous remercie d'avance pour vos réponses et je vous souhaite une bonne soirée d'haloween (la mienne sera sous le signe de la biologie moléculaire!)
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